dna-酶切、回收和連接(存儲版)
【正文】 。 分子生物學(xué)中經(jīng)常使用的是 II型限制性內(nèi)切酶 。 DNA片段膠回收的方法 二 .實驗原理 類專一識別雙鏈 DNA中特定堿基序列的核酸水解酶 ， 它們的功能類似于高等動物的免疫系統(tǒng) ， 用于抗擊外來 DNA的侵襲 。 ③ 產(chǎn)生一個新的磷酸二酯鍵 ， 把缺口封起來 。 pGFPuv和 pBSK的酶切體系： 酶切體系 質(zhì)粒載體（ pGFPuv和 pBSK） 10 RE buffer (E) 6 ?l 100 BSA ?l DNA 6 ?g EcoR I ?l Hind III ?l ddH2O X ?l → 合計 60 ?l 充分混勻后，用離心機短時（ 10秒）離心，于 37℃ 保溫 34小時或過夜， 65℃ 保溫 10分鐘使限制性內(nèi)切酶失活。 。 ⑨ 反應(yīng)體系： 10 內(nèi)切酶緩沖液 2?l DNA ?g 限制性內(nèi)切酶 25單位 用滅菌的 ddH2O補至 20?l， 37℃ 1小時。 DNA連接酶的作分三步： ① T4DNA 連接酶與輔助因子 ATP形成酶 AMP復(fù)合物 。 實驗七 基因片段的亞克隆 (DNA的酶切、回收和連接 ） 一 .實驗?zāi)康? DNA酶切的基本原理 。 3. DNA的連接 在 T4DNA連接酶的作用下 ， 平端或帶有相同粘末端的 DNA分子可以連接上 。 ⑧ 進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切反應(yīng)的結(jié)果 。
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