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[理學(xué)]如何做好酶切(存儲版)

2025-09-16 03:34上一頁面

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【正文】 BSA, 是否使用正確的緩沖溶液。保護堿基的數(shù)目隨酶的種類不同而不同,根據(jù)文獻(xiàn)資料匯總,一般保護堿基有34個就可以了。一般的做法是從50ulPCR反應(yīng)中回收的產(chǎn)物,溶解于45ul水中,加入酶,酶切后的產(chǎn)物通過從溶液中回收DNA的方式直接回收,不需要跑瓊脂糖電泳。這種提前混合的做法沒有問題,只是動作要快一些,沒有分裝前的Mix,要求放在冰里,盡快使用。 4) 甲基化程度對酶的活性是否有影響:細(xì)菌中主要有Dcm和Dam兩種甲基化方式,在植物和動物細(xì)胞中主要是CG位被甲基化。同時如果酶對甲基化敏感,還需要用Dcm, ,這種情況是很少發(fā)生。要完全酶切可以采用少量的酶長時間反應(yīng),或較高的酶量短時間處理都可以達(dá)到。對酶用量,模板用量,反應(yīng)體積等要素的確定需要的是時間和經(jīng)驗的積累。運輸和臨時存放時需要將酶至于冰上。您可以懷疑酶的質(zhì)量問題,但是更多的問題來源于模板是否合適酶切要求。這些公司提供酶的品質(zhì)一般都能得到保證。酶需要保存在20度的低溫環(huán)境中,只是在需要用酶才從冰箱中取出來。6) 注意模板用量和反應(yīng)體積的關(guān)系。一般酶切鑒定30分鐘就可以了。鑒定酶必須使用使用說明書上認(rèn)定的酶活確定的方式,通常需要用lambda DAN做模板來判定。Miniprep時如果用試劑盒抽提,需要的問題污染是變性劑和乙醇;如
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