[理學(xué)]如何做好酶切(專業(yè)版)
【正文】 3．如何設(shè)定PCR引物的保護(hù)堿基？ 如果您想直接對PCR產(chǎn)物酶切，同時(shí)想獲得理想的酶切效果，一般情況下需要在酶切位點(diǎn)序列5’端方向增加額外的保護(hù)堿基。我們公司銷售的SibEnzyme公司的酶，在分裝前嚴(yán)格檢驗(yàn)過，不合格的東西（很少）都退回原廠，所以不合格的產(chǎn)品是不會送到用戶手頭的。7) 酶切反應(yīng)的各個(gè)組分加完后，需要用TIP小心混勻幾次，short spin 一下就可以保溫了。下面幾點(diǎn)對你的酶切是有幫助的。 3) 正確使用和保存酶。9) 反應(yīng)時(shí)間的選擇。 3) 模板純度是否夠：模板制備方式影響DNA的質(zhì)量，制備過程中使用到乙醇，氯仿，苯酚，SDS, EDTA等如果殘留在最終的DNA模板中，都會不同程度影響酶的活性。結(jié)果是要么裝不上去，要么裝上去切不下來，測序發(fā)現(xiàn)末端引物堿基少了。注意有些研究人員將buffer長時(shí)間放在4度或室溫，這是很不規(guī)范的行為。 2．如果遇到酶切不動(dòng)或切不完全，該怎么辦？ 要回答這么問題常常需要了解酶活性單位是如何確定，我們多次接到這樣的問題：1個(gè)單位的酶能在60分鐘內(nèi)切1ug的DNA,為什么我們的DNA那么少切那么長時(shí)間也不能切開或切完全？ 從下面幾個(gè)因素去考慮： 1) 酶是否有活性：酶的活性單位通常是在60分鐘酶切1ug lambda
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