實驗二-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、酶切鑒定(存儲版)
【正文】 電泳基本操作原理：HCl，）（3）溴化乙錠（EB）操作步驟：（1）凝膠制備: 用TBE緩沖液配制1％瓊脂糖凝膠溶液，沸水浴或微波爐加熱使之融化，冷至55℃時加入溴化乙錠（EB），然后將其注入玻璃板或有機玻璃板組裝好的模子中，厚度依樣品濃度而定。在電泳過程中，凝膠中的溴化乙錠(EB)嵌入DNA分子中，在紫外線照射下，EBDNA復(fù)合物發(fā)出橙紅色熒光。因此，在設(shè)計一個PCRRFLP實驗的時候，應(yīng)該先尋找突變前后存在的自然酶切位點，當(dāng)沒有這樣的位點存在時，可以通過設(shè)計引物引入特定的限制性內(nèi)切酶酶切位點。星號活性出現(xiàn)的頻率根據(jù)酶、底物、反應(yīng)條件的不同而異，在非最佳條件下進(jìn)行酶切反應(yīng)容易出現(xiàn)星號活性，盡量用較少的酶進(jìn)行完全消化反應(yīng)（一般酶都貯存于50%的甘油中），這樣可以避免過度消化以及過高的甘油濃度干擾，樣本DNA在酶切反應(yīng)之前要純化去除雜質(zhì)避免有機溶劑（如制備DNA時引入的乙醇）的污染，并優(yōu)化酶切反應(yīng)體系pH值、離子等。...C A G A G (N)...539。紫外線對500bp以上DNA片段有效，對短片段效果不大。⑧使用尿嘧啶DNA糖基化酶控制PCR產(chǎn)物交叉污染。1）預(yù)防措施：①分開操作區(qū)域。3．吸加PCR試劑時戴上新塑料手套，并在超凈工作臺上操作，避免操作不當(dāng)建成污染。l混勻，用100181。實驗二 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、酶切鑒定第一節(jié) 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)目的：1．了解PCR基因擴增技術(shù)在DNA操作中的重要性及應(yīng)用范圍。 的位置(nt)復(fù)性溫度(℃)產(chǎn)物長度(bp)相互覆蓋長度(bp)Mit 1FCTC CTC AAA GCA ATA CAC TG61158802204Mit 1RTGC TAA ATC CAC CTT CGA CC1411Mit 2FCGA TCA ACC TCA CCA CCT CT124558802Mit 2RTGG ACA ACC AGC TAT CAC CA2007操作步驟：1. Eppendorf離心管內(nèi)加入PCR混合液25 181。2．用于PCR擴增的模板DNA一定要純，以防止反應(yīng)體系被痕量非目的基因模板
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