trizol法提取rna實(shí)驗(yàn)步驟及原理(新手詳細(xì)注釋版)-文庫(kù)吧資料
2025-07-02 00:03本頁(yè)面
【正文】 ；⑥棄上清后，室溫干燥57mins；⑦加入適量（2030ul）的DEPC水溶解沉淀65℃溶解，20℃（最好80℃）保存，檢測(cè)RNA濃度，并電泳檢測(cè)。注：此方法提取RNA A260/；產(chǎn)率估計(jì)：組織標(biāo)本：（ug RNA/mg組織）110ug，培養(yǎng)細(xì)胞（ug RNA/106 Cell）：515ug。（TE緩沖液由Tris和EDTA配制而成，主要用于溶解核酸，能穩(wěn)定儲(chǔ)存DNA和RNA。 1可用50ul H2O，TE %SDS溶解RNA樣品，5560℃,510min。 室溫晾干或真空干燥510min。 按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇（沉淀RNA），溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。 （沉淀RNA）混勻，室溫放置510min。 吸取上層水相，至另一離心管中。 （氯仿為有機(jī)溶劑，有效的使有機(jī)相和無(wú)機(jī)相迅速分離。 按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振蕩混勻后室溫放置15min。注：此時(shí)可放入70℃長(zhǎng)期保持。 2) 懸浮細(xì)胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5106動(dòng)物、植物或酵母細(xì)胞，或107細(xì)菌細(xì)胞。另外，組織體積不能超過(guò)Trizol體積的10%，否則勻漿效果會(huì)不好，用電動(dòng)勻漿器充分勻漿約需12分鐘。 （液氮既能使各種組織成分不易被破壞或降解,又能使組織變硬,脆性增加易于磨碎。C烘烤3小時(shí)以上。置于干凈處備用。 4）將DEPC水溶液小心倒到廢液瓶中，用鋁箔封住含已DEPC水處理過(guò)的塑料制品的燒杯，高溫高壓蒸氣滅菌至少30分鐘。 2）處理
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