固定化酶與固定化細(xì)胞-文庫吧資料
2025-06-01 05:48本頁面
【正文】 埋。 包埋法的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn) 微囊化制備方法 微囊法主要將酶封裝在膠囊、脂質(zhì)體和中空纖維中。 包埋法的缺點(diǎn) 是只有小分子底物和產(chǎn)物可以通過高聚物網(wǎng)架擴(kuò)散，對那些底物和產(chǎn)物是大分子的酶并不適合。 ? 低分子底物可以自由通過并進(jìn)入微囊內(nèi)。 此法制備條件溫和、生物相容性好，但僅可用于低分子量的底物，且常受擴(kuò)散限制。 ? 包埋法可分為 格型包埋和微囊型 包埋。 (4)包埋法 ? 通過物理或化學(xué)的方法將酶或細(xì)胞 限制 在一定的空間范圍內(nèi)，底物和產(chǎn)物能自由擴(kuò)散，從而達(dá)到重復(fù)利用生物質(zhì)的一種固定化方法。 3）吸附交聯(lián)法： 此法 先 將酶 吸附 在硅膠、皂土、氧化鋁、球狀酚醛樹脂或其他大孔型離子交換樹脂上， 再 用戊二醛等雙功能試劑 交聯(lián) ，用此法所得固定化酶也可稱為 殼狀固定化酶。 2 ）酶輔助蛋白交聯(lián)： 當(dāng)可得到的酶量有限，可以使用第二個(gè) “載體”蛋白 來增加蛋白質(zhì)濃度，從而使酶與惰性蛋白共交聯(lián)的方法。固定化依賴于酶與試劑的濃度、溶液 pH和離子強(qiáng)度、溫度和反應(yīng)時(shí)間之間的平衡。 ? 交聯(lián)法操作簡便，但交聯(lián)反應(yīng)往往比較激烈，許多酶容易在 固定化過程中失活，酶回收率不高。此法固 定化細(xì)胞的報(bào)導(dǎo)甚少，它的發(fā)展有賴于 新的溫和偶聯(lián) 方法和生物相容性好的偶聯(lián)試劑 的開發(fā) (3) 交聯(lián)法 ? 利用雙功能或多功能試劑在 酶分子間 、或酶分子與惰性蛋白間進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)以制備固定化酶的方法。 4) 要考慮到酶固定化后的 構(gòu)型 ，盡量減少載體的 空間位阻 對酶活力的影響。 2) 偶聯(lián)反應(yīng)的 反應(yīng)條件 必須在 溫和 pH、中等離子強(qiáng)度和 低溫 的緩沖溶液中。用溴化氰法活化瓊脂糖制備得到的固定化酶目前使用很廣，特別用作親和層析，有著良好的性能。 D．硅烷化法 D．硅烷化法 D．硅烷化法 E ．溴化氰法 ? 本方法主要用溴化氰（ CNBr）活化多糖類物質(zhì)。載體可以再生，壽命長等。 D．硅烷化法 ? 多孔玻璃特點(diǎn)： ? ① 機(jī)械強(qiáng)度好，表面積大。 C．烷基化反應(yīng)法 ? 含羥基的載體可用三氯三嗪等多鹵代物進(jìn)行活化，形成含有鹵素基團(tuán)的活化載體。最后與酶偶聯(lián) 。同時(shí)共價(jià)結(jié)合會(huì)影響到酶的空間構(gòu)象，從而對酶的催化活性產(chǎn)生影響。 共價(jià)偶聯(lián)法的優(yōu)點(diǎn) ： 得到的固定化酶結(jié)合牢固、穩(wěn)定性好、利于連續(xù)使用。 (2) 共價(jià)結(jié)合法 ? 借助共價(jià)鍵將酶的活性 非必須側(cè)鏈基團(tuán) 或細(xì)胞表面基團(tuán)（如氨基、羧基、羥基、巰基、咪唑基等）和載體的功能基團(tuán)進(jìn)行偶聯(lián)以達(dá)到固定化目的方法。采用這種方法時(shí)需事先確定載體和酶在電場中是否會(huì)分解和失活。其原理是：親水性載體可在其表面形成一層水膜，酶分子不溶于溶劑，只能存在于這層水膜中，因而可以完全被固定化 ? 微晶體法 將可結(jié)晶的物質(zhì)和酶溶液混合在一起，然后滴入親水有機(jī)溶劑中，當(dāng)可結(jié)晶物質(zhì)結(jié)晶析出時(shí)，酶就有規(guī)則吸附在晶體表面上 ? 電沉積法 。此法相當(dāng)于直接將酶涂布于載體上，避免了水相固定化中酶的大量流失 ? 溶劑沉淀法 即在低溫下向含有載體的脂肪酶液中加入酶的有機(jī)溶劑作沉淀劑 (如丙酮 )使酶析出，沉淀在載體表面。多孔性載體，要考慮吸附對象的大小 和總吸附面積的大小。 ? 溫度：蛋白質(zhì)往往是隨溫度上升而減少吸附。 ? pH：影響載體和酶的電荷變化 ,從而影響酶吸附。最常用的交換劑有 CM－纖維素、 DEAE－纖維素、DEAE－葡聚糖凝膠等。 (1) 吸附法 ? 物理吸附是通過 氫鍵、疏水鍵和 π電子親和力等物理作用力 將酶固定于不溶性載體的方法。 (1)固定化在一定程度上可以改善酶的穩(wěn)定性 ? 固定化增加了酶的耐熱性（熱變性原理） ? 固定化增加了酶對蛋白變性劑（尿素，鹽酸胍）等的抵抗能力 ? 固定化減少了蛋白酶的作用（阻礙了活性部位的接近） (2)固定化使酶和細(xì)胞的使用率提高 ? 江南大學(xué)的孫志浩通過卡拉膠包埋的方法，使酶的重復(fù)利用 30個(gè)批次后活性沒有明顯減少，大大促進(jìn)了酶的利用率，加速了工藝工業(yè)化進(jìn)程． (3)可精簡產(chǎn)物分離工序 底物和產(chǎn)物更容易和酶分離
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