固定化酶和細(xì)胞ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-01-11 09:10本頁(yè)面
【正文】 果 糖 漿果 糖 8 0 9 0 %果 糖 5 5 %葡 萄 糖 3 9 %低 聚 糖世界上生產(chǎn)規(guī)模最大的一種固定化酶。剩余的 D乙酰氨基酸經(jīng)過(guò)消旋化，生成 DL乙酰氨基酸，再進(jìn)行拆分。 本章 目錄 乙酰 DL — Ala L — Ala +乙酸 乙酰 D — Ala Aminoacylase 氨 基 酰 化 酶 5 固定化酶的應(yīng)用 世界上第一種工業(yè)化生產(chǎn)的固定化酶。 ? 固定化酶的 底物特異性 與游離酶比較可能有些不同，其變化與底物分子量的大小有一定關(guān)系。這一點(diǎn)在使用固定化酶時(shí)，必須引起注意。 ? 固定化酶的 最適作用溫度 一般與游離酶差不多， 活化能 也變化不大。 酶分子；（ a） 酶分子之間用雙功能基團(tuán)的化學(xué)交聯(lián) 試劑相互交聯(lián)成水不溶性的固定化酶；（ b）酶分子被 偶聯(lián)到水不溶性載體上 形成水不溶性的固定化酶 本章 目錄 酶分子之間共價(jià)交聯(lián)和與水不溶性載體共價(jià)偶聯(lián) 酵母細(xì)胞表面展示技術(shù) N H C H 2 C H 2 O P O O O N H 2 O H O O H O H O H O P O O O C H 2 C H C H 2 6 R12Mana 12Mana16 R2 Mana14Glc a1 Plasma membrane Protein Ethanalamine phasphate bridge Glycan Inositol 脂肪酶在畢氏酵母表面展示與篩選 C. antarctica 脂肪酶 B及 M. miehei 脂肪酶基因在酵母細(xì)胞表面的展示 4 固定化酶的特性： ? 將酶或含酶菌體固定化制成固定化酶或固定化菌體以后，由于受到載體等的影響， 酶的特性可能會(huì)有些變化。 常用的雙功能試劑有戊二醛、己二胺、順丁烯二酸酐、雙偶氮苯等。但由于交聯(lián)反應(yīng)條件較激烈，酶分子的多個(gè)基團(tuán)被交聯(lián)，致使 酶活力損失較大 ，而且制備成的固定化酶或固定化菌體的 顆粒較小 ，給使用帶來(lái)不便。 戊二醛有兩個(gè)醛基，這兩個(gè)醛基都可與酶或蛋白質(zhì)的游離氨基反應(yīng)， 形成席夫（ Schiff）堿 ，而使酶或菌體蛋白交聯(lián)，制成固定化酶或固定化菌體。 酶分子中可以形成共價(jià)鍵的基團(tuán)主要有：氨基、羧基、巰基、羥基、酚基和咪唑基等。 共價(jià)鍵結(jié)合法： 通過(guò)共價(jià)鍵將酶與載體結(jié)合的固定化方法稱為共價(jià)鍵結(jié)合法。離子鍵結(jié)合法所使用的載體是某些不溶于水的離子交換劑。 顆粒大小可實(shí)時(shí)監(jiān)控 脂質(zhì)體包裹酶 結(jié)合法 選擇適宜的載體，使之通過(guò)共價(jià)鍵或離子鍵與酶結(jié)合在一起的固定化方法。 半透膜包埋法： 將酶包埋在由各種高分子聚合物制成的小球內(nèi)，制成固定化酶。大多數(shù)為球狀或片狀，也可按需要制成其他形狀。 包埋法使用的多孔載體主要有：瓊脂、瓊脂糖、海藻酸鈉、角叉菜膠、明膠、聚丙烯酰胺、光交聯(lián)樹(shù)脂、聚酰胺、火棉膠等。 由于靠物理吸附作用， 結(jié)合力較弱 ，酶與載體結(jié)合不牢固而容易脫落，所以使用受到一定的限制。 常用的固體吸附劑有 活性炭、氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅膠、羥基磷灰石 等。 ? 功能基團(tuán) ：如游離的氨基、羧基、半胱氨酸的巰基、組氨酸的咪唑基、酪氨酸的酚基、絲氨酸和蘇氨酸的羥基等，當(dāng)這些功能基團(tuán)位于酶的活性中心時(shí)，要求不參與酶的固定化結(jié)合 ? 酶的高級(jí)結(jié)構(gòu) ：要避免用高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等處理，而且有機(jī)溶劑、高濃度的鹽也會(huì)使酶變性、失活，因此，操作應(yīng)盡量在非常溫和的條件下進(jìn)行。固定化原生質(zhì)體由于解除了細(xì)胞壁的障礙，更有利于胞內(nèi)物質(zhì)的分泌，這為胞內(nèi)酶生產(chǎn)技術(shù)路線的變革提供了新的方向。 1976年，法國(guó)首次用固定
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