20xx年醫(yī)學專題—第二篇酶及細胞的固定化-文庫吧資料
2024-11-13 12:19本頁面
【正文】 三、固定化酶（細胞(x236。bāo)的性質,第五十頁，共八十六頁。 （3）最適溫度和最適pH常保持不變。 （1）有活性升高的現(xiàn)象。ng)專一性,第四十九頁，共八十六頁。,（六）酶的作用(zu242。但大分子底物難于接近酶分子，導致(dǎozh236。zhēng),第四十八頁，共八十六頁。nɡ),固定化酶的表觀Km值顯著增加。 固定化載體與底物電荷相反,固定化酶的表觀Km值降低。,第四十七頁，共八十六頁。 帶正電荷載體 ：最適pH 向酸性偏移。 （四）酶的最適pH 帶負電荷載體 ：最適pH 向堿性偏移(piān y237。,（三）酶的最適溫度 最適溫度與酶穩(wěn)定性有關。 而固定化后， 70℃，15分鐘，有80%活性。,第四十四頁，共八十六頁。ng)； ②抑制酶的自身降解。,可能的原因： ①固定化增加了酶活性構象的牢固程度， 可防止酶分子伸展變形(bi224。 （二）酶的穩(wěn)定性 酶的耐熱性、對變性劑、抑制劑、蛋白酶的抵抗力增加。,（一）酶的活性 ： 通常(tōngch225。,第四十一頁，共八十六頁。,第二節(jié) 固定化酶和固定化細胞 的性質與表征 一、固定化酶的性質 影響酶催化活性的因素 1. 構象改變或立體(l236。 注意：一般要加滲透壓穩(wěn)定劑，以防止原生質體破裂。,一般采用網(wǎng)格包埋法（即凝膠包埋法）。u)的卡拉膠 ，70 ℃溶解, 再冷卻到 42℃, +10%左右(zuǒy242。,第三十七頁，共八十六頁。ng)的酶失活，而葡萄糖異構酶仍然保持活性，長期使用酶活力不減少。在5080℃加熱10分鐘，使菌體自溶作用(zu242。 2)吸附法 3)包埋法,2. 固定化方法(fāngfǎ),第三十五頁，共八十六頁。)、冰凍）、化學方法（如檸檬酸、各種絮凝劑）將細胞直接固定。,各種固定化方法(fāngfǎ)的優(yōu)缺點比較,第三十三頁，共八十六頁。,第三十一頁，共八十六頁。,第二十九頁，共八十六頁。,包埋法是目前應用最多的一種較理想(lǐxiǎng)的方法，與其它固定化方法相比： 優(yōu)點：不與酶蛋白氨基酸殘基反應，很少改變酶的高級結構，酶活回收率高。i)成本也較高。 缺點：反應條件要求高,制備(zh236。,與網(wǎng)格型包埋法相比，微囊型包埋法的優(yōu)點： 1）固定化酶顆粒小，有利于底物和產(chǎn)物擴散。 半透膜孔徑酶分子孔徑，小于半透膜孔徑的小分子底物和產(chǎn)物可以自由進出，被稱為“人工細胞”。,2）微囊型包埋法 （microencapsulation） 又稱半透膜包埋法 將一定量酶液包在半透性的高分子微孔(wēi kǒnɡ)膜內 。ng)的多孔載體及其特點,第二十五頁，共八十六頁。,1）網(wǎng)格(wǎnɡ ɡ233。 微囊型：將酶包埋在高分子半透膜中。分為(fēn w233。,第二十三頁，共八十六頁。ng)條件激烈，酶分子的多個基團被交聯(lián)，酶活力損失大。,第二十二頁，共八十六頁。)低時，交聯(lián)發(fā)生在分子內，酶仍保持溶解狀態(tài)。 酶濃度(n243。,第二十一頁，共八十六頁。ng)載體。)醛基，均可與酶或蛋白質的游離氨基反應,使酶蛋白交聯(lián)。 雙功能試劑： 常用的是戊二醛 O O H — C — CH2 — CH2 — CH2 — C — H,第十九頁，共八十六頁。,3.交聯(lián)法（crosslinking） 借助雙功能(gōngn233。 缺點：反應條件較激烈，易影響酶的空間構象而影響酶的催化活性。,優(yōu)點：酶與載體結合牢固，不會輕易脫落(tuōlu242。nɡ)的偶聯(lián)反應有：重氮化法、疊氮法、溴化氰法、烷基化法等。,常用(ch225。 酶分子:側鏈非必需基團：羧基，巰基，羥基，酚基，咪唑基。,2）偶聯(lián)方法： 偶聯(lián)成功(ch233。ch233。)偶聯(lián)法（covalent binding or covalent coupling）,第十四頁，共八十
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