菌種擴(kuò)大培養(yǎng)ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-09 05:19本頁(yè)面
【正文】 （ 色素 、 顆粒等 ） 單細(xì)胞：菌體健壯 、 菌形一致 、 均勻整齊 ， 有的還要求有一定的排列或形態(tài)； 霉菌 、 放線菌：菌絲粗壯 、 對(duì)某些染料著色力強(qiáng) 、 生長(zhǎng)旺盛、 菌絲分枝情況和內(nèi)含物情況好 。 因此首先必須保證生產(chǎn)菌種的穩(wěn)定性 ， 其次是提供種子培養(yǎng)的適宜環(huán)境保證無(wú)雜菌侵入 ， 以獲得優(yōu)良種子 。 過(guò)大會(huì)引起溶氧不足 ， 影響產(chǎn)物合成；而且會(huì)過(guò)多移入代謝廢物 ， 也不經(jīng)濟(jì)；過(guò)小會(huì)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間 ， 降低發(fā)酵罐的生產(chǎn)率 。 接種量的大小決定于生產(chǎn)菌種在發(fā)酵罐中生長(zhǎng)繁殖的速度 ， 采用較大的接種量可以縮短發(fā)酵罐中菌絲繁殖達(dá)到高峰的時(shí)間 ， 使產(chǎn)物的形成提前到來(lái)， 并可減少雜菌的生長(zhǎng)機(jī)會(huì) 。 如嗜堿性芽孢桿菌生產(chǎn)堿性蛋白酶 ， 12小時(shí)最好 （ 見(jiàn)下圖 ） 。 時(shí)間太長(zhǎng) ， 菌種趨于老化 ， 生產(chǎn)能力下降 ， 菌體自溶；種齡太短 ， 造成發(fā)酵前期生長(zhǎng)緩慢 。 種齡 種齡 ：是指種子罐中培養(yǎng)的菌絲體開(kāi)始移入下一級(jí)種子罐或發(fā)酵罐時(shí)的培養(yǎng)時(shí)間 。 例如 ， 青霉素的生產(chǎn)菌種在制備過(guò)程中將通氣充足和不足兩種情況下得到的種子分別接入發(fā)酵罐內(nèi) ， 它們的發(fā)酵單位可相差 1倍 。 培養(yǎng)基 種子培養(yǎng)基要滿足以下要求： （ 1） 營(yíng)養(yǎng)成分適合種子培養(yǎng)的需要 （ 2） 選擇有利于孢子發(fā)芽和菌體生長(zhǎng)的培養(yǎng)基； （ 3） 營(yíng)養(yǎng)上要易于被菌體直接吸收和利用； （ 4） 營(yíng)養(yǎng)成分要適當(dāng)豐富和完全 ， 氮源和維生素含量要高 （ 5） 營(yíng)養(yǎng)成分要盡可能與發(fā)酵培養(yǎng)基相近 。也影響到菌種的適應(yīng)期。例如在鏈霉素生產(chǎn)中，斜面孢子在 6℃ 冷藏兩個(gè)月后發(fā)酵單位比冷藏一個(gè)月降低 18%，冷藏 3個(gè)月后降低 35%。 而培養(yǎng) 5d以后冷藏 ， 20d未發(fā)現(xiàn)自溶 。 （ 2） 冷藏時(shí)間 斜面冷藏對(duì)孢子質(zhì)量影響與孢子成熟程度有關(guān) 。 過(guò)于衰老的孢子會(huì)導(dǎo)致生產(chǎn)能力的下降 。 在氣溫高含濕度大的地區(qū) ， 斜面孢子長(zhǎng)得慢 ， 主要由于試管下部冷凝水多而不利于孢子的形成 。 （ 2） 濕度 制備斜面孢子培養(yǎng)基的濕度對(duì)孢子數(shù)量和質(zhì)量有較大影響 。 培養(yǎng)條件 （ 1） 溫度 如土霉素生產(chǎn)菌種在高于 37℃ 培養(yǎng)時(shí) ， 孢子接入發(fā)酵罐后出現(xiàn)糖代謝變慢 ， 氨基氮回升提前 ， 菌絲過(guò)早自溶 ， 效價(jià)降低等現(xiàn)象 。 菌種在固體培養(yǎng)基上可呈現(xiàn)多種不同代謝類(lèi)型的菌落，氮源品種越多，出現(xiàn)的菌落類(lèi)型也越多，不利于生產(chǎn)的穩(wěn)定。 磷含量太多或太少也會(huì)影響孢子的質(zhì)量 。 原材料質(zhì)量的波動(dòng) ， 也會(huì)影響孢子質(zhì)量 。 例如：在四環(huán)素 、 土霉素生產(chǎn)中 ， 配制產(chǎn)孢子斜面培養(yǎng)基用的麩皮 ， 因小麥產(chǎn)地 、 品種 、 加工方法及用量的不同對(duì)孢子質(zhì)量的影響也不同 。 第三節(jié) 種子質(zhì)量的控制 一 、 影響種子質(zhì)量的因素及控制 影響種子質(zhì)量的因素通常有：培養(yǎng)基 、 培養(yǎng)條件 、 培養(yǎng)時(shí)間和冷藏時(shí)間等 。 但也與所選用工藝條件有關(guān) 。 比如： 細(xì)菌 ：生長(zhǎng)快 ， 種子用量比例少 ， 級(jí)數(shù)也較少 ， 二級(jí)發(fā)酵 。 種子罐的作用 使孢子發(fā)芽 ， 生長(zhǎng)繁殖成菌 （ 絲 ） 體 ， 接入發(fā)酵罐能迅速生長(zhǎng) ， 達(dá)到一定的菌體量 ， 以利于產(chǎn)物的合成 。 從三角瓶到卡氏培養(yǎng)罐培養(yǎng)期間 ， 均需定時(shí)搖動(dòng)或通氣 ， 使酵母菌液與空氣接觸 ，以有利與酵母菌的增殖 。 將保存的酵母菌種接入含 10ml麥芽汁的 5001000ml三角瓶中 ， 再于 25℃ 培養(yǎng) 23d。 其過(guò)程如下： 試管 → 三角瓶 → 搖床 → 種子罐 厭氧培養(yǎng) 酵母菌 （ 啤酒 ， 葡萄酒 ， 清酒等 ） 其種子的制備過(guò)程如下： 試管 → 三角瓶 → 卡式罐 → 種子罐 例如 : 生產(chǎn)啤酒的酵母菌一般保存在麥芽汁瓊脂或 MYPG培養(yǎng)基（ 培養(yǎng)基配制： 3g麥芽浸出物 ， 3g酵母浸出物 ， 5g蛋白胨 ， 10g葡萄糖和 20g瓊脂于 1L水中 ） 的斜面上 ， 于 4℃ 冰箱內(nèi)保藏 。 （ 二 ） 液體種子制備 好氧培養(yǎng) 對(duì)于產(chǎn)孢子能力不強(qiáng)或孢子發(fā)芽慢的菌種 ， 如產(chǎn)鏈霉素的灰色鏈霉菌 （ S. griseus） 可以用搖瓶液體培養(yǎng)法 。 培養(yǎng)溫度一般為 28℃ 。 培養(yǎng)時(shí)間一般為 4~14d。 霉菌的制備 霉菌孢子的培養(yǎng)一般以大米 、 小米 、 玉米 、 麩皮 、 麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基 。 培養(yǎng)溫度一般為 37℃ 。 產(chǎn)孢子能力不強(qiáng)或孢子發(fā)芽慢的菌種 ， 可用液體培養(yǎng)法 。 發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中的種子的必須滿足以下條件： （ 1） 菌種細(xì)胞的生長(zhǎng)活力強(qiáng) ， 移種至發(fā)酵罐后能迅速生長(zhǎng) ，遲緩期短； （ 2） 生理性狀穩(wěn)定； （ 3） 菌體總量及濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求； （ 4） 無(wú)雜菌污染； （ 5） 保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力 。 種子擴(kuò)大培養(yǎng) ：是指將保存在砂土管 、 冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后 ， 在經(jīng)過(guò)扁瓶或搖瓶及種子罐逐級(jí)放大培養(yǎng)而獲得一定
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