蛋白質(zhì)iippt課件-文庫吧資料
2025-05-08 08:56本頁面
【正文】 ? 四級結(jié)構(gòu)的維系 ? 疏水力是維系四級結(jié)構(gòu)的主要方式 ? 亞基之間的契合關(guān)系 ? 寡聚蛋白質(zhì)與別構(gòu)效應(yīng) ? 基本概念 ? 別構(gòu)效應(yīng)（ allosteric effect）： 指蛋白質(zhì)與配基結(jié)合改變蛋白質(zhì)的構(gòu)象，進(jìn)而改變蛋白質(zhì)的生物活性的現(xiàn)象 ? 別構(gòu)蛋白質(zhì)（ allosteric protein）： 具有別構(gòu)效應(yīng)的蛋白質(zhì)，多為 寡聚蛋白， 包括 活性部位 和 調(diào)節(jié)部位 ? 同位效應(yīng)： 指別構(gòu)蛋白質(zhì)與一種配基的結(jié)合對于該蛋白和 同種配基 的結(jié)合能力的影響 ? 正協(xié)同效應(yīng) ： 第一個配基的結(jié)合引起第二個，第三個 …配基更容易結(jié)合。 ? 疏水鍵，在蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)中起著重要作用。 ? 回形拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)（ ??? ）： 反平行式 β－折疊片中常出現(xiàn)的一種超二級結(jié)構(gòu)。彼此相互作用，形成有規(guī)則，在空間上能辨認(rèn)的二級結(jié)構(gòu)組合體充當(dāng)三級結(jié)構(gòu)的構(gòu)體，稱為超二級結(jié)構(gòu)。產(chǎn)生一種不很穩(wěn)定的環(huán)形結(jié)構(gòu) ? β轉(zhuǎn)角多數(shù)都處在球狀蛋白質(zhì)分子表面 ? 常出現(xiàn)在 β轉(zhuǎn)角的 Aa ? 類型 II的 C3常為 Gly ? Asn、 Asp、 Pro、 Cys、 Ser、 Thr 蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu) ? 定義： ? 蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu) (Tertiary Structure)是指在二級結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上，肽鏈的不同區(qū)段的側(cè)鏈基團(tuán)相互作用在空間進(jìn)一步盤繞、折疊形成的包括主鏈和側(cè)鏈構(gòu)象在內(nèi)的特征三維結(jié)構(gòu)。重復(fù)周期 ， 常見于 纖維狀蛋白 ? 所有的肽鍵都參與鏈間氫鍵的交聯(lián)，氫鍵與肽鏈的長軸接近垂直。 ，重復(fù)周期 ，常見于 球狀蛋白 ? 反平行式：相鄰肽鏈的極性相反， ?＝－ 139176。 ? 平行式：各肽鏈的排列極性（ N→C）是同一方向的， ?＝－ 119176。 ? 310螺旋（ n=2）：一般只出現(xiàn)在 ?轉(zhuǎn)角內(nèi) ? （ n=4） : 緊縮螺旋，某些核酸結(jié)合蛋白 ? 不同氨基酸對 ?螺旋結(jié)構(gòu)形成的影響 ? 利用多聚氨基酸分析 ? R基小，不帶電荷的 Aa，易于形成 ?螺旋結(jié)構(gòu)： Ala、Val、 Glu、 His等 ? 當(dāng)一圈螺旋形成以后，再加入殘基形成螺旋就變得容易了 ? 帶相同電荷的 Aa，相互臨近的區(qū)域，不容易形成 ?螺旋結(jié)構(gòu) ? C?附近支 鏈長的氨基酸，對 ?螺旋的形成是不利的，尤其 Ile將破壞 ?螺旋的穩(wěn)定 ? Pro的 C?N1， C?C2單鍵 不能旋轉(zhuǎn)，不具有亞氨基，不能形成鏈內(nèi)氫鍵，所以 ?螺旋在 Pro處中斷，形成結(jié)節(jié)（ kink）。 ? ?螺旋是不對稱的分子結(jié)構(gòu)，具有旋光能力，天然αhelix的不對稱因素引起右旋。均由 L型 Aa殘基構(gòu)成 ， 右手 ?螺旋和左手 ?螺旋不是對映體，蛋白質(zhì)中 ?螺旋幾乎均為右手的，右手的比左手的穩(wěn)定 ? 每圈螺旋占 AA殘基，沿螺旋軸方向上升。 ψ＝－ 48176。它只涉及肽鏈主鏈的構(gòu)象及鏈內(nèi)或鏈間形成的氫鍵 ? 研究方法 ： ? X衍射 ? 圓二色性 ? 核磁共振 ? 熒光偏振 ? 肽平面二面角與蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu) ? C?N1， C?C2單鍵，可自由旋轉(zhuǎn) ? ?角 繞 C?N1鍵旋轉(zhuǎn)的角度 ?Ψ角 繞 C?C2鍵旋轉(zhuǎn)的角度 ? ? 、 Ψ原則上可以在 180+180 之間任意取值 ? 多肽鏈的所有可能構(gòu)象都能用 ? 、 Ψ這兩個 構(gòu)象角描述， 每一對 ? 、 Ψ 稱 肽平面的二面角。 ? 激活作用是通過凝血酶切去纖維蛋白原 N末端富含酸性氨基酸的 A、 B肽，然后在 XIIIa（纖維蛋白穩(wěn)定因子）作用下，發(fā)生交聯(lián)而實現(xiàn)凝血 ? 其他一級結(jié)構(gòu)變化與功能 ? 磷酸化：許多生物酶可以通過磷酸化 /去磷酸化實現(xiàn)活性的改變。 ? 蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)和生物功能的關(guān)系 ? 同源蛋白質(zhì)的種屬差異與生物進(jìn)化 ? 基本概念： ? 同源蛋白質(zhì)：在不同的有機體中實現(xiàn)同一功能的蛋白質(zhì) ? 順序同源：同源蛋白質(zhì)的 Aa順序的相似性。 ? 短肽類抗生素 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測定 ? 氨基酸順序測定的一般步驟 ? 要求： ? 樣品均一 ? 純度 97%以上 ? 已知分子量 （誤差小于 10%） ? 一般步驟： ? 測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目 ? 蛋白質(zhì)末端殘基（ NH2末端、 COOH末端） mol數(shù) ? 蛋白質(zhì)的分子量 ? 拆分蛋白質(zhì)分子的多肽鏈 ? 測定多肽鏈的 Aa組成 ? 分析多肽鏈的 N末端和 C末端殘基 ? 斷裂多肽鏈內(nèi)的二硫鍵 ? 過甲酸氧化 ? 巰基化合物還原 ? 多肽鏈斷裂成肽段 ? 酶解法 ? 化學(xué)法 ? 測定各個肽段的 Aa順序 ? Edman降解法 ? 確定肽段在多肽鏈中的次序 ? 確定原多肽鏈中二硫鍵的位置 ? 多肽 N末端分析方法 ? 二硝基氟苯（ DNFB or FDNB法）， Sange試劑 ? 丹磺酰氯（ DNS）法 ? 原理：與 DNFB相同 ? 優(yōu)點： DNS具強烈的熒光， 檢測靈敏度可以達(dá)到 1?109mol比 DNFB法高 100倍 ? 苯異硫氰酸酯（ PITC）法 ? 氨肽酶法 ： ? 氨肽酶： 可以從多肽鏈的 N端 逐個 降解氨基酸的 肽鏈外切 酶 ? 亮氨酸氨肽酶（ LAP） ：水解以 Leu為 N末端的肽鍵速度為最大 ? 多肽 C末端分析方法 ? 肼解法 ? 蛋白質(zhì) or 多肽＋無水肼 , C末端 Aa以游離形式存在，其他Aa轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的 Aa酰肼化物加入苯甲醛可以使 Aa酰肼化物轉(zhuǎn)變成二苯基衍生物沉淀， C末端 Aa則在溶液中。這類多肽通常都具有特殊的生理功能，常稱為活性肽 ? 常見活性多肽 ? 谷胱甘肽（ GSH） ? ?GluCysGly ? 巰基緩沖劑 ? 腦啡肽（ enkephalins） ? 神經(jīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生的一類短肽，具有多種特殊生物學(xué)功能。 ? 為肽和蛋白質(zhì)特有（兩個或兩個以上肽鍵），氨基酸沒有該反應(yīng)。 ? 肽鍵的特點 ? 酰胺鍵： 由于酰胺氮上的孤對電子與相鄰羰基的共振作用，表現(xiàn)出高穩(wěn)定性 ? C－ N具 40％雙鍵性質(zhì) ? C＝ O具 40％單鍵性質(zhì) ? 共振雜化體 ? 亞氨基（－ NH－） pH 0－ 14沒有明顯的解離和質(zhì)子化傾向 ? 肽鍵是一個平面，稱肽平面。 （ 4）人工合成的多聚 AA的 X射線衍射圖案和紅外吸收光譜與天然的纖維狀蛋白質(zhì)十分相似。 （ 2） 人工合成肽可以被蛋白酶水解 O ‖ （ 3） 包含 CN H基團(tuán)的化合物如雙縮脲 H2NCONHNH2能與硫酸銅 氫氧化鈉溶液產(chǎn)生雙縮脲顏色反應(yīng)。蛋白質(zhì)（ II） —— 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)的
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