蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)-文庫吧資料
2025-05-06 12:07本頁面
【正文】 合力等方面作徹底的評價后，才可使用所取得的抗血清。在無菌條件，吸出血清，分裝（ ～ ），貯于 80℃ 以下冰箱，或凍干后貯存于 4℃ 冰箱保存。 ? 小鼠取血。當(dāng)抗體效價達到預(yù)期水平時，即可放血制備抗血清。 ? 在第 2次加強免疫后 2周，從耳緣靜脈取 2～ 3mL血，制備血清，檢測抗體效價。加強免疫時用不完全佐劑。 （六）免疫方法 ? 抗原劑量，首次劑量為 10～ 50μ g，加強免疫的劑量約為首次劑量的 1/4。這是 不完全福氏佐劑 。 ? 目前實踐中常應(yīng)用的佐劑 福氏佐劑 。 ? 皮下注射 （五）佐劑 ? 應(yīng)用佐劑的目的 是為了提高抗原對機體的免疫原性，從而提高抗體的效價。 ? 一般常用 皮下或背部多點皮內(nèi)注射 ，每點注射。 ? 不同的抗原，其免疫原性的強弱均不相同，這種免疫原性的強弱取決于抗原的分子量、化學(xué)活性基團、立體結(jié)構(gòu)等。 （三）抗原 ? 抗原是多種多樣的，就其化學(xué)成分而言，有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。 ? 如要獲得大量的抗體，多采用大動物； ? 如要是獲得直接標(biāo)記診斷的抗體，則直接采用本動物； ? 如要獲得間接的標(biāo)記診斷用抗體，則必須用異源動物制備抗體； ? 如果難以獲得的抗原，且抗體的需要量少，則可以采用純系小鼠制備。一般為 6個月大小的動物。因此，進行動物免疫時，必須選擇對該抗原敏感的、年輕的健康動物。 ? 機體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是 多克隆抗體 。 ? 由一種抗原決定簇刺激機體，由一個 B淋巴細胞接受該抗原所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體（ Monoclone antibody）。此外，尚需考慮免疫途徑、抗原劑量、注射次數(shù)、時間間隔、有無佐劑等因素。 蛋白質(zhì)免疫印跡檢測技術(shù) 一、實驗?zāi)康? 二、實驗原理 三、實驗儀器 四、操作步驟 五、實驗結(jié)果與分析 六、思考題 一、實驗?zāi)康? ? 學(xué)習(xí)掌握動物抗血清的制備原理及技術(shù) ? 通過實際操作學(xué)會動物抗血清的制備 ? 掌握 Western－ blotting的基本原理 ? 熟悉 Western－ blotting的實驗操作 二、實驗原理 ? 第一部分 動物的常規(guī)免疫及抗血清的制 備 ? 第二部分 Western－ blotting 檢測抗血清 ? 將適當(dāng)?shù)?抗原 物質(zhì)注入動物體內(nèi)，經(jīng)過一定時間，動物血清中可出現(xiàn)大量特異性抗體，這種含抗體的血清稱為 免疫血清 。 ? 具有分析容量大、敏感度高、特異性強等優(yōu)點。 ? 1975年， Southern建立了將 DNA轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜（ NC膜）上，并利用 DNA－ RNA雜交檢測特定的 DNA片段的方法，稱為 Southern 印跡法 。 ? 因抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體的檢測中多采用血清作試驗，所以 體外抗原抗體反應(yīng)亦稱為血清學(xué)反應(yīng)（ serologic reaction）?？砂l(fā)生于 體內(nèi) （ in vivo），也可發(fā)生于 體外 （ in vitro）。 ? 人體血清中 IgG含量最多， IgA次之， IgM較少， IgD和 IgE微量。存在于血清
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