【正文】 環(huán)增加一個氨基酸l 進(jìn)位(entrance)/注冊（registration）l 成肽(peptide bond formation)l 轉(zhuǎn)位(translocation)延長因子EFG有轉(zhuǎn)位酶活性，促進(jìn)mRNA肽酰tRNA由A位前移到P位，促進(jìn)卸載tRNA釋放蛋白質(zhì)生物合成的調(diào)節(jié)1. 閱讀框架的漂移、重疊和5’AUG的作用2. 翻譯錯誤：氨基酰合成酶校正3. RNA的結(jié)構(gòu)：帽子、poly (A)尾、空間結(jié)構(gòu)4. 蛋白質(zhì)生物合成阻斷劑：① 抗生素類—大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素、氨基糖苷類、四環(huán)素② 抗代謝藥物—抗腫瘤藥③ 其他生物活性物質(zhì)—白喉毒素、干擾素分子伴侶一類在序列上沒有相關(guān)性但有共同功能的蛋白質(zhì)。→339?！浞较?，由起始密碼子AUG開始，每3個核苷酸組成的三聯(lián)體，決定肽鏈上某一個氨基酸或蛋白質(zhì)合成的起始、終止信號，稱為三聯(lián)體密碼。 3）不同tRNA的內(nèi)含子長度和序列各異，1446bp剪接特點(diǎn)： (1) 沒有邊界序列，也沒有內(nèi)部引導(dǎo)序列； (2) 剪切反應(yīng)的識別信號是 “三葉草” 的二級結(jié)構(gòu)； (3) 不是轉(zhuǎn)酯反應(yīng)。3）內(nèi)含子5’端有一保守序列5’GUAAGUA3’，和剪接體中U1 snRNA的5’端的3’CAUUUCAU5’互補(bǔ)?！?′polyA尾巴的功能1與mRNA從細(xì)胞核轉(zhuǎn)送到細(xì)胞質(zhì)有關(guān)2穩(wěn)定mRNA結(jié)構(gòu)，保持生物半衰期3與真核mRNA的翻譯效率有關(guān)：①缺失可抑制體外翻譯的起始 ②含 poly(A) 的mRNA 失去 poly(A) 可減弱其翻譯2. rRNA前體的加工初始轉(zhuǎn)錄本為45S前體，18S， 是一個轉(zhuǎn)錄本5sRNA前體獨(dú)立于其他三種rRNA的基因轉(zhuǎn)錄前體rRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合，然后再切割和甲基化 3. tRNA前體的加工①真核的前體分子tRNA是單順反子，成簇排列，基因間有間隔區(qū)；②前體分子兩端都有附加序列需核酸內(nèi)切酶和外 切酶切除；③3’端加CCA ；④tRNA的前體分子中含有內(nèi)含子需切除；⑤堿基修飾RNA的剪接RNA剪接(RNA splicing) ：一個基因的外顯子和內(nèi)含子共同轉(zhuǎn)錄在一條轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中，將內(nèi)含子去除而把外顯子連接起來形成成熟RNA分子的過程1 內(nèi)含子(intron) — 成熟RNA的序列中不出現(xiàn)的序列2 外顯子(exon) — 在斷裂基因及其初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物上出現(xiàn)，并表達(dá)為成熟RNA的核酸序列內(nèi)含子的分類1.Ⅰ類內(nèi)含子 — 含有中部核心結(jié)構(gòu)（細(xì)胞器基因、核基因 ）2.Ⅱ類內(nèi)含子 — 不含有中部核心結(jié)構(gòu)（細(xì)胞器線粒體基因、核基因 ）3.Ⅲ類內(nèi)含子 — 具有 GU－AG 特征的邊界序列（核基因mRNA前體 ） — tRNA基因的內(nèi)含子（位于 tRNA 的反密碼環(huán)上） 第I類含子的剪接— rRNA的自我剪接1結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： ①邊界序列 5’UG 3’ ②有由保守序列形成的二級結(jié)構(gòu)2剪接特點(diǎn)：A自我剪接：主要由轉(zhuǎn)酯反應(yīng)構(gòu)成，完全由內(nèi)含子自身完成B形成明顯的二級結(jié)構(gòu)：產(chǎn)生適于剪接反應(yīng)的構(gòu)象和活性位點(diǎn)，在G參與下完成剪接反應(yīng) 第Ⅱ類內(nèi)含子的剪接結(jié)構(gòu)特點(diǎn)(1) 邊界序列 5’ GUAG；(2) 二級結(jié)構(gòu)：a. 有6個莖環(huán)結(jié)構(gòu)，b. 分支點(diǎn)序列剪接特點(diǎn) 1）自我剪接 2）反應(yīng)需要一價和二價離子，不需能量第Ⅲ類內(nèi)含子的剪接— hnRNA的剪接剪接特點(diǎn)：a. 剪切過程和Ⅱ類內(nèi)含子十分相似，b. 本身不能形成二級結(jié)構(gòu)，依賴于snRNPs進(jìn)行剪接 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1）邊界順序：符合GUAG法則。RNAaseP 存在時 RNAaseD可達(dá)最大活性3 tRNA核苷酸轉(zhuǎn)移酶：以ATP和CTP為前體，催化 tRNA（Ⅱ型）的3’端生成CCA；CCA末端常丟失，該酶有修復(fù)作用；識別tRNA的空間結(jié)構(gòu)，無種屬特異性4 RNAase Ⅲ：與RNAaseO、RNAaseP2的功能相似，負(fù)責(zé)切開間隔序列 真核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工1 mRNA前體的加工①5’端形成特殊的帽子結(jié)構(gòu)②3’端切斷一段序列并加上poly A尾巴③通過剪切去除由內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄來的序列④鏈內(nèi)部核苷酸甲基化⑤真核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工1） 5’端加帽帽子的三種類型：帽子0（Cap0） m7GpppX（共有）— m7G；N7—甲基鳥苷帽子1 （Cap1）m7GpppXm — 第一個核苷酸的 2’O 位上產(chǎn)生甲基化帽子2（Cap2） m7GpppXmYm — 第二個核苷酸的 2’O 位上產(chǎn)生甲基化425’端帽子結(jié)構(gòu)的重要性： a. 翻譯起始的必要結(jié)構(gòu)，為IFⅢ（起始因子）和核糖體對mRNA的識別提供信號b. 增加mRNA的穩(wěn)定性，保護(hù)mRNA 免遭5’外切核酸酶的攻擊c. 運(yùn)輸，有助于mRNA越過核膜，進(jìn)入胞質(zhì)2） 3’端加尾a、 大多數(shù)的真核mRNA 都有3’端的多聚尾巴（polyA)，約為200bp。②初始轉(zhuǎn)錄物多為多順反子rRNA轉(zhuǎn)錄后加工包括:1剪切： 前體被RNaseⅢ、RNaseR等剪切2修飾：修飾酶進(jìn)行堿基修飾3裝配： rRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核糖體的大、小亞基3，tRNA的加工 ①tRNA 初始轉(zhuǎn)錄本是多順反子②加工包括：A核酸內(nèi)切酶在tRNA兩端切斷B核酸外切酶從3’端逐個切去附加順序C在3’端加上CCAOHD核苷酸的修飾參與tRNA后加工的酶1, RNAaseP：內(nèi)切核酸酶，負(fù)責(zé)切割所有tRNA分子的5‘端。原核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工1，mRNA: 轉(zhuǎn)錄生成的初級轉(zhuǎn)錄本mRNA不需經(jīng)過復(fù)雜的加工過程即可表現(xiàn)功能。2 轉(zhuǎn)錄起始過程需要很多轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor, TF ）參與，按一定順序與DNA形成復(fù)合物，協(xié)助RNA pol定位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)3 RNApol前移處處都遇上核小體，轉(zhuǎn)錄延長過程中可以觀察到核小體移位和解聚現(xiàn)象真核生物轉(zhuǎn)錄的終止爪蟾轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)：TT3均含有7個堿基的保守序列5’—GACTTGG—3’T2是前體rRNA轉(zhuǎn)錄的初始終止位點(diǎn)T3是“失敗保險終止位點(diǎn)”轉(zhuǎn)錄的抑制作用 阻斷、抑制或干擾RNA的代謝過程，最終抑制轉(zhuǎn)錄的一類化合物1嘌呤或嘧啶類似物：巰基嘌呤、氟尿嘧啶2通過與DNA結(jié)合改變模板的功能：烷化劑、放線菌素、溴乙錠3與RNA酶結(jié)合影響其活力： 利福平/利福霉素—與原核細(xì)胞RNA聚合酶的β亞基非共價結(jié)合，阻止RNA轉(zhuǎn)錄的起始 α鵝膏蕈堿—真核生物RNA聚合酶Ⅱ的抑制劑轉(zhuǎn)錄后加工及其機(jī)制轉(zhuǎn)錄后加工:將各種前體RNA分子加工為成熟的各種RNA順反子：與多肽鏈相對應(yīng)的DNA片段連同啟動部位和終止部位原核生物mRNA為多順反子，即幾個結(jié)構(gòu)基因，利用共同的啟動子和終止信號經(jīng)轉(zhuǎn)錄成一條mRNA。2 在RNA鏈的終止和釋放過程中起重要作用3 轉(zhuǎn)錄終止①酶停止向正在延伸的RNA鏈添加核苷酸，開放三元復(fù)合物解體。 (ρ)因子的轉(zhuǎn)錄終止 (ρ)因子的轉(zhuǎn)錄終止依賴r因子的終止：有些終止位點(diǎn)不形成強(qiáng)的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，需用ρ蛋白來幫助轉(zhuǎn)錄終止r因子：：六聚體蛋白、水解各種核甘三磷酸促使新生RNA鏈從三元轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中解離出來，從而終止轉(zhuǎn)錄。不影響轉(zhuǎn)錄起始但對轉(zhuǎn)錄效率十分重要(大腸桿菌RNA聚合酶全酶所識別的啟動子區(qū)) 圖★真核生物啟動子RNA聚合酶I的啟動子 1．核心啟動子（core promoter），由45～+20位核苷酸組成，單獨(dú)存在時就足以起始轉(zhuǎn)錄。 10區(qū)：TATA區(qū)(Pribnow box)，RNA聚合酶的牢固結(jié)合位點(diǎn)216?！?原因：射線(紫外線和電離輻射)、化學(xué)誘變劑、堿基修飾、DNA插入劑DNA損傷的類型1各種射線 2化學(xué)誘變劑：堿基類似物、烷化劑、DNA插入劑等DNA的修復(fù)系統(tǒng)1復(fù)制修復(fù)：校正DNA復(fù)制過程中產(chǎn)生的堿基錯誤連接①尿嘧啶糖基酶系統(tǒng)：切除進(jìn)入DNA分子的尿嘧啶核苷酸②錯配修復(fù)：原核細(xì)胞內(nèi)存在Dam甲基化酶，能使位于5`GATC序列中腺苷酸的N6位甲基化。 ★1．同義突變：突變沒有引起編碼氨基酸變化，不影響蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)★2．錯義突變：堿基序列的改變引起表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)氨基酸序列的改變★3．無義突變：指某個堿基的改變使編碼某種氨基酸的密碼子變?yōu)榻K止密碼子，使肽鏈過早終止，蛋白產(chǎn)物一般沒有活性 突變的原因1自發(fā)突變（spontaneous mutation)：由于正常的細(xì)胞活動，或細(xì)胞與環(huán)境的隨機(jī)相互作用的過程所引起的生物DNA序列的改變。 2．移碼突變（frameshift mutation）：指DNA片段中某一位點(diǎn)插入或丟失一個或幾個（非3或3的倍數(shù)）堿基對時，造成插入或丟失位點(diǎn)以后的一系列編碼順序發(fā)生錯位的一種突變。雙鏈體的復(fù)制以滾環(huán)復(fù)制方式進(jìn)行線狀DNA的復(fù)制過程1．復(fù)制從DNA中間開始—T7噬菌體復(fù)制起始必需的三個酶：T7RNA聚合酶、T7DNA聚合酶和基因4蛋白(gene product 4, gp4)復(fù)制由轉(zhuǎn)錄開始必需以RNA為引物2．復(fù)制從末端開始—腺病毒, 以單鏈置換形式進(jìn)行復(fù)制逆轉(zhuǎn)錄病毒的復(fù)制逆轉(zhuǎn)錄酶：1．RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶（以RNA為模板合成DNA）2．DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶（以DNA為模板合成DNA）3．核糖核酸酶H (RNase H)活性基因突變★突變(mutation)—DNA堿基序列發(fā)生可遺傳的改變1．堿基置換：指DNA分子中一個堿基對被另一個不同的堿基對取代所引起的突變，也稱為點(diǎn)突變（point mutation）。外切酶活性，去除錯誤堿基，有校對作用 5’→3’外切酶活性，去除RNA引物及修正錯誤堿基,可水解成klenow片段和一個小片段DNA的復(fù)制過程★半不連續(xù)復(fù)制(semidiscontinuous replication) —DNA復(fù)制過程中，先導(dǎo)鏈合成是連續(xù)的；后隨鏈合成是先形成小片段(岡崎片段 )，再連接而成大片段。DNA聚合酶活性；339。有兩個終止區(qū)域，需要tus基因的產(chǎn)物識別終止區(qū)信號序列，阻止復(fù)制叉繼續(xù)前進(jìn)②線狀DNA分子的復(fù)制終點(diǎn)：串聯(lián)體模型 DNA復(fù)制的酶學(xué)： ①解旋酶(helicase)：通過ATP獲能，沿5‘→3’方向解開DNA雙鏈②單鏈DNA結(jié)合蛋白（singlestrand binding protein, SSB):單鏈DNA結(jié)合，阻止其再形成雙鏈體狀態(tài)③拓?fù)洚悩?gòu)酶 （DNA Topisomerase ）：催化DNA拓?fù)洚悩?gòu)體相互轉(zhuǎn)換，松弛超螺旋(DNA polymerase)①大腸桿菌DNA聚合酶 I：★三種活性539。3 col質(zhì)粒：攜帶有產(chǎn)生大腸桿菌素（colicin）酶系基因的質(zhì)粒4 質(zhì)粒噬菌體(phagemid) : ★質(zhì)粒DNA特性1. 質(zhì)粒DNA具有自我復(fù)制的能力，但要由細(xì)菌染色體多種酶系統(tǒng)來完成2．質(zhì)粒DNA所編碼的基因產(chǎn)物賦予細(xì)菌某些性狀特征3．質(zhì)?？勺孕衼G失與消除4．質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性5．質(zhì)粒具有不相容性 質(zhì)粒的復(fù)制有兩種1嚴(yán)緊型質(zhì)粒：當(dāng)細(xì)胞染色體復(fù)制一次時，質(zhì)粒也復(fù)制一次，每個細(xì)胞內(nèi)只有1～2個質(zhì)粒2松弛型質(zhì)粒：當(dāng)染色體復(fù)制停止后仍然能繼續(xù)復(fù)制，每一個細(xì)胞內(nèi)一般有20個左右質(zhì)粒 質(zhì)粒的不相容性：當(dāng)某種質(zhì)粒在宿主細(xì)胞內(nèi)存在時，將阻止其他類質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞寄宿質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性：質(zhì)粒通過細(xì)菌的結(jié)合作用，將質(zhì)粒復(fù)制子轉(zhuǎn)移到新的宿主細(xì)菌內(nèi) 質(zhì)粒中的選擇性標(biāo)記鑒定穩(wěn)定接受質(zhì)粒的細(xì)菌群，常用抗生素抗性基因做標(biāo)記1，氨芐青霉素（ampr）2，四環(huán)素 （tetr）3，氯霉素（camr/cat）4，卡那霉素 (Kanr )第四章DNA的復(fù)制、突變、損傷和修復(fù)DNA的復(fù)制★半保留復(fù)制：DNA復(fù)制過程中，兩條鏈分別做模板各自合成一條新的DNA鏈，子代DNA分子中一條鏈來自親代DNA，另一