【正文】 時則自上而下地褪色變白。適溫培養(yǎng)1－2d觀察，在菌落周圍形成乳白色混濁環(huán)，表示卵磷脂被分解，生成脂肪，說明該菌株有卵磷脂酶存在。接種與觀察結果：將測試菌點接在卵黃平板上，每皿可分散點接4－5株菌、（芽孢桿菌以點接1－2株菌為宜）以不影響結果觀察為度，如測試厭氧菌，則須在上面加蓋無菌的蓋玻片。假若與對照管相比較，在卵黃胰胨液中或表面，形成白色沉淀者，則為陽性反應，表示卵磷脂被分解，生成脂肪和水溶性的磷酸膽堿，說明有卵磷酶的存在。卵磷脂酶的測定菌體如存在有卵磷脂酶，就能使卵磷脂分解生成脂肪和水溶性的磷酸膽堿。以肉湯培養(yǎng)液根據(jù)鑒定需要，配成不同濃度的NaCl，如2％、％、5％、7％、10％等。由于不同菌類耐鹽性不同，故常以此作為鑒別特征。經30分、……24h進行觀察，如有黃色者則為陽性。測定步驟：（1） 將測定菌接種于TSI斜面上，培養(yǎng)于37℃18h（或其他最適溫度）（2） ，每管加1滴甲苯，搖勻（有助于酶的釋放），于37℃放置5分鐘。本試驗用于腸桿菌科細菌初步生化篩選，與三糖鐵瓊脂等聯(lián)合使用可顯著提高篩選功效。培養(yǎng)物呈現(xiàn)黑色為硫化氫陽性，混濁或沿穿刺線向外生長為有動力，然后加Kovacs氏試劑數(shù)滴于培養(yǎng)表面，靜置10min，若試劑呈紅色為靛基質陽性。1硫化氫靛基質動力（SIM）瓊脂試驗　　試驗方法：以接種針挑取菌落或純養(yǎng)物穿刺接種約1/2深度，置36177。分裝試管，每管2mL。葡萄糖酸無還原性基團，氧化后形成酮基，則可將斐林氏試劑的呈藍色的銅鹽還原為磚紅色的Cu2O沉淀。反之，如測定培養(yǎng)基未變色，而空白對照培養(yǎng)基生長，則為陰性，即不利用丙二酸鹽。接種和觀察結果：用幼齡菌種接種測定培養(yǎng)基和空白培養(yǎng)基，于適溫培養(yǎng)1－2d，觀察培養(yǎng)基變色情況。能否利用丙二酸鹽，也是細菌鑒定中的一個鑒別性特征。接種與觀察結果：取幼齡菌種接種于斜面上，適溫培養(yǎng)3－7天，培養(yǎng)基呈堿性（藍色）者為陽性反應，不變者則為陰性。紙條變黑為陽性。也可用醋酸鉛紙條法：將待試菌接種于一般營養(yǎng)肉湯，再將醋酸鉛紙條懸掛于培養(yǎng)基上空，以不會被濺濕為適度；用管塞壓住置36177。1℃培養(yǎng)24~28h，培養(yǎng)基呈黑色為陽性。1硫化氫（H2S）試驗　　有些細菌可分解培養(yǎng)基中含硫氨基酸或含硫化合物，而產生硫化氫氣體，硫化氫遇鉛鹽或低鐵鹽可生成黑色沉淀物。當指示劑呈紫色或帶紅色調的紫色者為陽性，呈黃色者為陰性。接種后封油，對照管與測定管同時接種封油。當培養(yǎng)基含胺類時呈堿性反應，使指示劑變色。1氨基酸脫羧酶的測定 有些細菌含有氨基酸脫羧酶，使羧基釋出，生成胺類和二氧化碳?！　”驹囼灴赏瑫r觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產酸或產酸產氣（變黃）；產生硫化氫（變黑）。1三糖鐵（TSI）瓊脂試驗　　試驗方法：以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培養(yǎng)物，穿刺接種并涂布于斜面，置36177。1C培養(yǎng)24h時后，取約2ml培養(yǎng)液，加入Kovacs氏試劑2~3滴，輕搖試管，呈紅色為陽性，或先加少量乙醚或二甲苯，搖動試管以提取和濃縮靛基質，待其浮于培養(yǎng)液表面后，再沿試管壁徐緩加入Kovacs氏試劑數(shù)滴，在接觸面呈紅色，即為陽性。吲哚與對二甲基氨基苯醛結合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。靛基質（Imdole）試驗　　某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。進行試驗時必須有未接種的培養(yǎng)基管作為陰性對照?！　≡囼灧椒ǎ号R試前將試劑的A（磺胺酸冰醋酸溶液）和B（α－萘胺乙醇溶液）、加于液體培養(yǎng)物或瓊脂斜面培養(yǎng)物表面，立即或于10min內呈現(xiàn)紅色即為試驗陽性，若無紅色出現(xiàn)則為陰性。硝酸鹽（Nitrate）還原試驗　　有些細菌具有還原硝酸鹽的能力，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨或氮氣等。一般常用的指示劑為酚紅、溴甲酚紫，溴百里藍和Andrade指示劑。C培養(yǎng)，每天觀察結果，檢視培養(yǎng)基顏色有無改變（產酸），小倒管中有無氣泡，微小氣泡亦為產氣陽性，若為半固體培養(yǎng)基，則檢視沿穿刺線和管壁及管底有無微小氣泡，有時還可看出接種菌有無動力，若有動力、培養(yǎng)物可呈彌散生長。接種后，置36177?？捎弥甘緞┘鞍l(fā)酵管檢驗。發(fā)酵型產酸則開管及閉管均產酸，如產氣，則在瓊脂柱內產生氣泡。適溫培養(yǎng)7天觀察結果。（1）接種 ：以18－24h的幼齡菌種，穿刺接種在上述培養(yǎng)基中，每株菌接4管，其中2管用油封蓋（凡士林：液體石蠟＝1：1混合后滅菌），－1厘米厚，以隔絕空氣為閉管。一般用葡萄糖作為糖類代表。為此，Hugh和Leifson提出一種含有低有機氮的培養(yǎng)基，用以鑒定細菌從糖類產酸是屬氧化型產酸或發(fā)酵型產酸。前者包括的菌種類型為多數(shù)。葡萄糖的氧化發(fā)酵試驗在細菌鑒定中，糖類發(fā)酵產酸是1項重要依據(jù)。適溫培養(yǎng)7天后觀察，凡測定菌在有碳水化合物的培養(yǎng)基中生長情況，明顯超過空白培養(yǎng)基的生長量為陽性，否則為陰性。平板培養(yǎng)用接種環(huán)點種，液體培養(yǎng)則用直針接種。有些底物不宜用高壓滅菌，可用過濾法滅菌后加入已滅菌的基礎培養(yǎng)基中，某些醇類和酚類不必滅菌。糖的含量一般為1％，－％，％。培養(yǎng)基可制成液體，分裝試管，也可制成固體平板。測定的基礎培養(yǎng)基配方很多，因種而異。在用于芽胞桿菌和葡萄球菌等其它細菌時，通用培養(yǎng)基中的磷酸鹽可阻礙乙酰甲基醇的產生，故應省去或以氯化鈉代替。不產酸的培養(yǎng)物不能使用。C恒溫箱，如2h內仍不顯現(xiàn)紅色、可判定為陰性。Cα萘酚（2naphthol）,再加40%，搖動2~5min，陽性菌常立即呈現(xiàn)紅色，若無紅色出現(xiàn)，靜置于室溫或36177。1176。C水浴放置2h后判定結果者。C恒溫箱，若4h內不呈現(xiàn)伊紅、即判定為陰性。C培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液1ml加O’Meara試劑（%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氫氧化鈉水溶液）1ml，搖動試管1~2min，靜置于室溫或36177?！　≡囼灧椒ǎ骸　。保㎡’Meara氏法：將試驗菌接種于通用培養(yǎng)基，于36177。隨酸度而增強黃色，則隨堿度而增強黃色，可能變色不夠明顯，此時應延長培養(yǎng)時間，重復試驗。迄至發(fā)現(xiàn)陽性或至第5天仍為陰性、即可判定結果。C（以30176。1176。甲基紅（Methyl Red）試驗 　　腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物，使甲基紅指示劑變紅。也可將過氧化氫溶液直接加入斜面上，觀察氣泡的產生。1． 試劑：3－10％過