常用免疫學(xué)相關(guān)實驗技術(shù)及方法(1)-文庫吧資料
2025-01-27 14:50本頁面
【正文】 NA聚合酶催化的一系列合成反應(yīng)中 ， 用兩段寡核苷酸作為反應(yīng)的引物 。 常用的分 Ficoll和 Percoll兩種 。 1. 自然沉降法 2. 聚合物加速沉降法 二 、 外周血單個核細胞的分離 外周血單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞 ， 其體積 、形態(tài)和密度與其他細胞不同 ， 紅細胞和多核白細胞密度較大 ， 為 ， 而淋巴細胞和單核細胞密度為 ， 血小板為 。 這種技術(shù)有兩大優(yōu)點 ， 是一加快了沒淀反應(yīng)的速度 ， 二是將一些蛋白質(zhì)組分利用其電荷的不同將其分開 ， 再分別與抗體反應(yīng) ， 以其沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價 。免疫印跡技術(shù)結(jié)合了凝膠電泳分辯力高和固相免疫測定敏感 、 簡便 、穩(wěn)定等優(yōu)點 。 (五 )免疫印跡技術(shù) (immunoblot) 免疫印跡技術(shù)也稱 Western blot或蛋白印跡技術(shù) (protein blot)，是 20世紀(jì) 70年代末 80年代初發(fā)展起來的一種蛋白質(zhì)抗原檢測新技術(shù) 。 該方法是用化學(xué)的方法將酶與抗體結(jié)合起來 (類似于 ELISA)， 然后將標(biāo)記的抗體與組織切片中的抗原產(chǎn)生特異性的結(jié)合 。 這個反應(yīng)的結(jié)果 —— 含有熒光標(biāo)記的抗原 、 抗體結(jié)合物 ， 可用熒光顯微鏡來觀察之 。 (三 )免疫熒光技術(shù) (immunofluorescence technology) 免疫熒光技術(shù)的原理是將熒光色素與特異性抗體 (或抗原 ， 但少用 )以化學(xué)的方式結(jié)合起來 ， 但不影響該血清抗體的免疫特性 。 最終特異性結(jié)合的抗原 、 抗體復(fù)合物殘留在反應(yīng)板或試管中 。 非特異性吸附可以通過加入過量的非特異性卵磷脂蛋白或洗滌液來封閉 。 被檢測抗原即未標(biāo)記物 ， 通常吸附在固相載體中 ， 如多孔酶聯(lián)塑料板或試管中 。 (二 )放射免疫測定 (radioimmunoassay) 放射免疫測定通常用于測定組織液和血液中的激素水平 。 具體操作時是把受檢標(biāo)本 (檢測其中的抗體或抗原 )和酶標(biāo)抗原蔌抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng) ， 經(jīng)洗滌后使固相載體上形成的抗原 、 抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開 ， 最后結(jié)合到固相載體上的酶量與標(biāo)本中的受檢物質(zhì)的量成一定的比例 。 三 、 抗體的應(yīng)用及其相應(yīng)的免疫學(xué)技術(shù) (一 )ELISA ELISA的基本原理是利用酶標(biāo)記抗體或抗原 ， 使之成為酶標(biāo)抗體 (或抗原 )。 2. 單克隆抗體制備 (monoclonal antibody) 單克隆抗體是指由一個識別一種抗原表位的 B細胞克隆產(chǎn)生的同源抗體 。 合成肽與載體蛋白連接后能有效誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生免疫應(yīng)答 常用方法： tea bag method 純化方法：反向高效液相色譜法 二 、 抗體制備 1. 多克隆抗體制備 (polyclonal antibody) 多克隆抗體是指在自然免疫或免疫動物后產(chǎn)生的具有不同特異性和親和性的多種抗體混合分子 。 19世紀(jì) 80年代： Pasteur預(yù)防雞霍亂的疫苗 狂犬病疫苗 1888： Behring發(fā)現(xiàn)了抗體 Methchnikoff發(fā)現(xiàn)了巨噬細胞 20世紀(jì)初：發(fā)現(xiàn)了調(diào)理素 ， 體液因素可影響吞噬細胞功能 19001930：認(rèn)識了過敏反應(yīng) ， 發(fā)現(xiàn)了血清病 Arthus反應(yīng) ， 皮膚反應(yīng) 調(diào)理作用 ， 補體結(jié)合反應(yīng) 疫苗研究有了新發(fā)展： BCG—— 結(jié)核 白喉毒素 —— 白喉 19351957：抗體純化 ， 鑒定及測定技術(shù) 、
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