【正文】 6O 胡蘿卜醇 C15H26O 檜萜醇 C10H16O 醋酸檜酯 C12H18O2 新植二烯 C20H38 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 16 表 32 亞臨界精油化學(xué)組成及其相對(duì)含量 保留時(shí)間/min 化合物名稱 相對(duì)百分含量 /% 分子式 乙醇 C2H6O 2 丙酮 C3H6O 丙酮 C3H6O 二氯甲烷 CH2Cl2 二氯甲烷 CH2Cl2 甲苯 C7H8 α側(cè)柏烯 C10H16 α蒎烯 C10H16 莰烯 C10H16 檜 C10H16 β蒎烯 C10H16 β月桂烯 C10H16 α水芹烯 C10H16 α異松油烯 C10H16 鄰傘花烴 C10H14 冰片 C10H16 β水芹烯 C10H16 1,8 桉葉素 C10H18O γ松油烯 C10H16 反式檜水合物 C10H18O δ4蒈烯 C10H16 順式 β萜品醇 C10H18O 內(nèi)冰片 C10H18O 春黃菊腦 C10H16O Z檸檬 C10H16O 枯茗醛 C10H12O 3,7二甲基 （ E） 2,6辛二烯醛 C10H16O 草蒿腦 C10H12O 苯基 1,2乙二醇 C8H10O2 1(7),2對(duì) 孟二烯 4醇 C10H16O γ杜松烯 C15H24 常用植物香料提取液對(duì)黃曲霉抑制效果的研究 17 由表 31 可知，水蒸餾法得到的孜然精 油主要成分為枯茗醛 %， 雙丙酮醇%， 對(duì)異丙基苯甲醇 % ，二氯甲烷 %，以及其他 γ松油烯， 春黃菊腦 ，菖蒲二烯， β甜沒(méi)藥烯等化合物。亞臨界萃取得到精油共檢測(cè)出 57 個(gè)成分，鑒定了占精油含量 %的 50 個(gè)成分（圖 32）。 GCMS 分析得到的總離子流譜圖，如圖所示分別為水蒸餾得到的精油和亞臨界萃取得到的精油的總離子流譜圖。需陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 12 用多層 保鮮膜包裹后于 4℃ 冰箱中保存?zhèn)溆?。亞臨界萃取的精油顏色較水蒸餾法更深，香味更濃。 亞臨界萃取技術(shù)是近十幾年來(lái)剛剛興起的一種新型萃取技術(shù)，具有萃取時(shí)間短、效率高、能耗低、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，但仍然存在著萃取率有待提高的問(wèn)題，且當(dāng)樣品不同時(shí)，需清洗儀器，存在儀器清洗不干凈問(wèn)題，導(dǎo)致精油中有可能混有其他樣品，降低了精油的純度。 水蒸氣蒸餾法的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求不高、易操作、成本較低、產(chǎn)品純度高，然而提取時(shí)間較長(zhǎng)、提取率一般較低，提取的物質(zhì)主要為萜烯類 (以單萜烯為主 )和芳香族的芳香物質(zhì)，而非揮發(fā)性成分（如色素、抗氧化成分及營(yíng)養(yǎng)性成分）或高沸 點(diǎn)的物質(zhì)一般不會(huì)被提取出來(lái)。 該方法但在蒸餾過(guò)程中植物原料受熱焦化，易導(dǎo)致熱不穩(wěn)定成分揮發(fā)損失和分解，對(duì)有些組分有大的破壞作用，進(jìn)而影響精油的質(zhì)量和試驗(yàn)結(jié)果。該方法設(shè)備簡(jiǎn)單、容易操作，適用于在水中溶解度不大的成分的提取，可分為水蒸餾和水蒸氣蒸餾兩種方式。 28℃ 下 培養(yǎng) 10 h，分別于 0、 10h分別 用顯微鏡分析觀察黃曲霉孢子的萌發(fā) 狀態(tài)，記錄并分析圖像。再向每孔中接入 10 μL 黃曲霉孢子懸浮液，蓋上蓋玻片。 （ 2） 繼 續(xù)培養(yǎng) 24 h后采用棉蘭染色法挑取少許菌絲在顯微鏡下進(jìn)行觀察分析，觀察兩種不同方法提取出的孜然精油對(duì) 黃曲霉 ， 同時(shí)觀察不經(jīng)孜然精油處理的黃曲霉菌絲體形態(tài)， 記錄并分析圖像。待培養(yǎng)基凝固后分別在三個(gè)平板上滴各 10 μL黃曲霉 ，微晃使其分布均勻， 28℃培養(yǎng) 24 h。 培養(yǎng)期為 57天。以上操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。 （ e）將培養(yǎng)基全部倒置放在 28℃下培養(yǎng)。 (c) 吸取制備好的 黃曲霉 10 μL分別滴在濾紙片上，倒置。 （ a）將溶化的培養(yǎng)基分別倒 入平皿中各 20 mL，混勻，待凝固。實(shí)驗(yàn)組二： 3，4， 5號(hào)培養(yǎng)皿 （三個(gè)平行）。 （ 2 ） 孢子懸浮液的制備：用 2 ml 左右的無(wú)菌生理鹽水將黃曲霉斜面上的孢子沖洗下（采用第一代黃曲霉），倒入棕色小瓶，然后放在搖床上震蕩，使成團(tuán)的孢子打散。 （ b）配制時(shí)，按每 100 mL馬鈴薯浸汁加入 12 gβ環(huán)糊精， 2 g瓊脂，繼續(xù)加熱融化，并補(bǔ)足失水。 80℃浸泡 1 h，用紗布過(guò)濾，然后補(bǔ)足失水至所需體積。 菌種 活化 ① 用浸過(guò) 70％ 酒精的脫脂棉擦凈安瓿瓶 ② 用鑷子將鋁封口打開(kāi) ③ 取約 mL菌體懸浮液移植于指定的瓊脂培養(yǎng)基上，剩余的菌懸液注入指定的液體培養(yǎng)基中（ 34 mL），然后在 28℃ 下培養(yǎng) 5 d，再次接種培養(yǎng) 5 d完成第二代培養(yǎng)。 GCMS 條件 ： （ 1） 色譜條件：色譜柱 ： DB5 30 （ μm） film； （ 2） 溫度：氣化室溫度 250℃ ； （ 3） 程序升溫 ： 40℃ （ 3 min）以 10℃ /min 上升到 90℃ ， 再以 8℃ /min 上升到 250℃ （ 8min）； 進(jìn)樣量 μL； 載氣 ： 氦氣 ； 流量 ： 1ml /min； 分流比 60： 1。 （ 2） 亞臨界萃取法 [17] 原料處理方法：采回后經(jīng) 60℃ 烘干、粉碎，過(guò) 60 目篩后于 45℃ 冰箱中保存?zhèn)溆谩?用無(wú)水乙醚萃取餾出液，每次加乙醚約 90ml ，萃取三次， （ 餾出液與乙醚比例為 1:1） 將三次乙醚萃取液合并，萃取液以無(wú)水硫酸鈉干燥后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑獲 得精油。（此處為常壓蒸餾）料液比為 1:5，溫度一般為 98℃ 左右。 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備 常用植物香料提取液對(duì)黃曲霉抑制效果的研究 7 表 21 所需儀器與設(shè)備 設(shè)備名稱 設(shè)備型號(hào) 生產(chǎn)廠家 1000 ml 三口燒瓶 蒸餾頭 蛇形冷凝管 尾接管 接受瓶 分液漏斗 打孔器 亞臨界工藝技術(shù)裝置 FA2022 常州市特威電氣自動(dòng)化系統(tǒng)有限公司 電子天平 722N 上海精密科學(xué)儀器有限公 司 電子調(diào)溫萬(wàn)用電爐 DK98Ⅱ 天津市泰斯特儀器有限公司 OPTEC 奧特光學(xué)生物顯微鏡 BK5000 重慶奧特光學(xué)儀器有限公司 顯微鏡數(shù)碼顯像系統(tǒng) S/N T3003581 西安中顯光電科技有限公司 隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱 PYXDHS50X65BSII 生物安全柜 BSC1300A2 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠 快速混勻器 手提式壓力蒸汽滅菌器 YXQSG4628OS 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 RE52A 上海亞榮生化儀器廠 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 8 實(shí)驗(yàn)方法 孜然精油的提取 （ 1）傳統(tǒng)水蒸餾法 原料處理方法：采回后經(jīng) 60℃ 烘干、粉碎 ,過(guò) 60 目篩后于一 45℃ 冰箱中保存?zhèn)溆谩? 馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基（ PDB 培養(yǎng)基）：馬鈴薯 200 g、葡萄糖 20 g、蒸餾水1L、自然 pH、 121℃ 高 壓滅菌 20 min。 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 6 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)菌株 Aspergillus flavus CGMCC 購(gòu)于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心， PDA 培養(yǎng)基 4℃ 保存。 （ 5） 研究其對(duì)黃曲霉孢子萌發(fā)的影響。 （ 4） 研究其對(duì)黃曲霉菌絲體形態(tài)的影響。 （ 3） 運(yùn)用固體培養(yǎng)即生長(zhǎng)速 率法（揮發(fā)接觸）來(lái)研究不同方法提取出的孜然精油對(duì)黃曲霉生長(zhǎng)的影響。將油水直接分離或用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑出去。 本研究選取常用植物香料孜然為材料，多角度觀察其提取液對(duì)產(chǎn)毒黃曲霉的抑制效果，初步探討該提取液抑制黃曲霉的過(guò)程及機(jī)理。鑒于化學(xué)防 腐劑使用條件所限、長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生生物抗藥性和累積性毒害等缺點(diǎn)，目前人們已將目光轉(zhuǎn)向從生物中尋找天然抗菌活性成分（如香精油）作為防腐劑并已成回歸自然的時(shí)尚。我國(guó)是一個(gè)人口大國(guó)，食品需求量巨大，食品的貯藏、防霉保鮮是食品工業(yè)所面臨的重大課題。張應(yīng)烙等（ 2022） 報(bào)道孜然精油對(duì)蘋(píng)果霉心病菌、棉花枯萎病菌、白菜黑斑病菌、小麥紋枯病菌表現(xiàn)出強(qiáng)烈的抑制作用 [16]。結(jié)果表明，這幾種提取物表現(xiàn)出不同的抑菌能力 [14]。李偉等（ 2022） 對(duì)孜然精油抑菌活性進(jìn)行了初步的研究，發(fā)現(xiàn)孜然精油對(duì)米曲霉、黑曲霉、根霉、枯草芽胞桿菌、白色葡萄球菌和大腸桿菌有很強(qiáng)的抑制作用 [13]。 孜然精油的抑菌活性研究概況 國(guó)內(nèi)外對(duì)孜然精油的抑菌活性做了許多的研究，發(fā)現(xiàn)孜然精油都具有優(yōu)良的廣譜抑菌活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，最佳工藝條件陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 4 為：浸泡時(shí)間 h、 微波功率 200 W、提取時(shí) 間 45 min， 在此條件下精油提取率為 %[11]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用微波輔助技術(shù)提取孜然精油，不但速度大大加快，而且精油的得率達(dá)到了 %[10]。巴拉提 （ 2022） 研究同時(shí)蒸餾萃取法提取新疆孜然精油的提取工藝，在最佳提取工藝條件下，孜然精油的萃取得率為 %， 同時(shí)對(duì)孜然精油進(jìn)行物理化學(xué)分析，表明孜然精油性質(zhì)穩(wěn)定，且具有非常高的應(yīng)用價(jià)值。侯旭杰等（ 2022）采用水蒸氣法結(jié)合有機(jī)溶劑提取孜然精油，發(fā)現(xiàn)比單獨(dú)采用水蒸氣法提取的孜然精油的得率 要高。曾家豫等 （ 2022）采用水蒸氣蒸餾法提取孜然精油 , 研究了提取時(shí)間對(duì)精油得率的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蒸餾 3 h，揮發(fā)油得率達(dá)到最大值 [8]。孜然精油是一種天然植物香料，具有抑菌、抗氧化、降血糖、殺蟲(chóng)、防癌抗癌等重要功能，已被美國(guó)食品藥品管理局（ FDA）等世 界性組織兒認(rèn)可，用于食品和日常香精香料的加工之中 [6]。 孜然精油的研究概況 目前最常用的孜然精油的提取方法主要有超臨界 CO2 萃取、亞臨界萃取、水蒸餾法、微波輔助萃取以及有機(jī)溶劑萃取法等。在做湯和燉肉時(shí)若加入孜然滋味尤其好，拉丁美洲人燒肉時(shí)使用孜然已十分普遍；近年來(lái)美國(guó)流行的墨西哥食品其中就是加了孜然的； 對(duì)于風(fēng)靡我國(guó)的新疆烤羊肉串來(lái)說(shuō)，孜然更是必不可少的調(diào)料。人類使用孜然作為調(diào)味料已有二千多年的歷史。目前世界各國(guó)馬耳他、塞浦路斯、獨(dú)聯(lián)體、摩洛哥、阿爾及利亞、伊朗、敘利亞、印度、巴基斯坦、印度尼西亞、土耳其等均有種植。孜然原產(chǎn)于埃及、埃塞俄比亞，我國(guó)新疆、甘肅河西走廊地區(qū)有大量種植，前蘇聯(lián)、地 中海地區(qū)、伊朗、印度及北美也有栽培。 常用植物香料提取液對(duì)黃曲霉抑制效果的研究 3 化學(xué)法中，一般是用農(nóng)藥等化學(xué)物質(zhì) [2]。 物理方法中，常見(jiàn)的有見(jiàn)的有紫外線照射法。 黃曲霉毒素產(chǎn)毒的控制 黃曲霉及其毒素危害巨大，對(duì)其產(chǎn)毒的控制方法，一般有生物，化學(xué)，物理等方法。家庭自制發(fā)酵食品也能檢出黃曲霉毒素，尤其是高溫高濕地區(qū)的糧油及制品種檢出率更高。據(jù)悉，黃曲霉毒素的危害性在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞