高效液相色譜ppt課件(2)-文庫吧資料
2025-01-21 17:31本頁面
【正文】 或緩沖溶液作流動相的凝膠色譜法。 分離原理 固定相： 化學(xué)惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝膠、親水凝膠、無機(jī)多孔材料。凝膠內(nèi)具有一定大小的孔穴， 體積大的分子不能滲透到孔穴中去而被排阻，較早地被淋洗出來；中等體積的分子部分滲透；小分子可完全滲透入內(nèi)，最后洗出色譜柱。 207 排阻色譜法 一、分離原理 二、排阻色譜的填料和流動相 三、應(yīng)用 一、分離原理 排阻色譜是按分子大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法。離子對色譜也可采用正相色譜的模式，即可以用硅膠柱，但不如反相色譜效果好，多數(shù)情況下采用反相色譜模式，所以離子對色譜也常稱反相離子對色譜。 離子對色譜 在流動相中加入適當(dāng)?shù)木哂信c被測離子相反電荷的離子，即 離子對試劑 ，使之與被測離子形成中性的離子對化合物，此離子對化合物在反相色譜柱上被保留。在反相色譜的非極性（或弱極性）固定相中的保留又太小。有很多大分子或離解較弱的有機(jī)離子需要采用通常用于中性有機(jī)化合物分離的反相（或正相）色譜。 離子交換色譜所用的緩沖液，通常用下列化合物配制：鈉、鉀的檸檬酸鹽，磷酸鹽，甲酸鹽與其相應(yīng)的酸混合成酸性緩沖液或氫氧化鈉混合成堿性緩沖液等。當(dāng)待分析物質(zhì)電離后產(chǎn)生的離子可與樹脂上可游離的平衡離子進(jìn)行可逆交換 。 分離原理 離子交換色譜法是利用不同待測離子對固定相親和力的差別來實現(xiàn)分離的 。它不僅適用無機(jī)離子混合物的分離，亦可用于有機(jī)物的分離，例如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子。 206 離子交換色譜法 一、分離原理 二、固定相 三、流動相 四、應(yīng)用 應(yīng)用 此法是利用 離子交換原理和液相色譜技術(shù)的結(jié)合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法 。是當(dāng)今液相色譜的最主要分離模式，幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有機(jī)物質(zhì)的分離。 反相 HPLC 由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，與正相 HPLC體系正好相反。此時 ， 組分的分配比 k值隨其極性的增加而增大 ， 但隨流動相極性的增加而降低 。 目前，對于反相色譜的保留機(jī)制還沒有一致的看法，大致有兩種觀點，一種認(rèn)為屬于 分配色譜 ，另一種認(rèn)為屬于吸附色譜 。鍵合相可分為下列四種鍵型。 ? 優(yōu)點 ∶ – 固定相穩(wěn)定，不易流失 – 應(yīng)用廣泛，可使用多種溶劑 – 消除硅羥基的不良影響 ? 缺點 ∶ – pH值不能小于 3 – 同樣填料，各種牌號色譜柱不盡相同 一、化學(xué)鍵合固定相法 化學(xué)健合固定相一般都采用硅膠（薄殼型或全多孔微粒型）為基體。 反相色譜在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用最為廣泛。 205 化學(xué)鍵合相色譜法 化學(xué)鍵合相色譜指在化學(xué)鍵合固定相上進(jìn)行物質(zhì)分離的一種液體色譜方法。以極性物質(zhì)作固定相，非極性溶劑作流動相的液液分配色譜，被稱為正相分配色譜，適合于分離極性化合物；選用非極性物質(zhì)為固定相，而極性溶劑為流動相的液一液色譜稱為反相分配色譜，這種色譜方法適合于分離芳烴，稠環(huán)芳烴及烷烴等化合物。 204 液液色譜法 一、分離原理 二、固定相 三、流動相 四、應(yīng)用實例 分配色譜的分離機(jī)理 基于樣品分子在流動相和固定相間的溶解度不同（分配作用）而實現(xiàn)分離的液相色譜分離模式 分配色譜概述 ? 反相色譜的主要類型，基于分子的極性分離 ? 洗脫次序：一般為反相，即極性高的先被洗脫 ? 常用的流動相： – 有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈，水 – 應(yīng)用添加劑，成為離子對、離子抑制方法 ? 常用固定相： – 碳十八、碳八、胺基等基團(tuán) – 反相色譜固定相多為鍵合相 流動相 在液液色譜中，除一般要求外，還要求流動相對固定相的溶解度盡可能小。 應(yīng)用 由于硅羥基活性點在硅膠表面常按 一定幾何規(guī)律排列 ，因此吸附色譜用于結(jié)構(gòu)異構(gòu)體分離和族分離仍是最有效的方法。堿性吸附劑則適于分離酸性溶質(zhì)，如酚、和吡咯衍生物等。酸性吸附劑包括硅膠等，堿性吸附劑有氧化鋁等。 極性吸附劑 包括硅膠、氧化鋁等。 二、 LSC固定相 液固吸附色譜法采用的固體吸附劑按其性質(zhì)可分為極性和非極性兩種類型。 吸附色譜的分離機(jī)理 ? 隨著樣品在固定相上的吸附能力由大到小 ? 在色譜柱上的保留由長到短 吸附色譜概述 ?分離基于樣品的極性差異。吸附劑是一些多孔的固體顆粒物質(zhì)，存在一些分散的具有表面活性的吸附中心。 167。 常用溶劑 : 己烷 、 四氯化碳 、 甲苯 、 乙酸乙酯 、 乙醇 、 乙腈 、 水 。 組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反 。 （ 2） 親水性固定液常采用疏水性流動相 ， 即流動相的極性小于固定相的極性 ， 稱為正相液液色譜法 ， 極性柱也稱正相柱 。 3. 流動相及流動相的極性 （ 1） 可顯著改變組分分離狀況的流動相選擇在液相色譜中顯得特別重要 。例如利用紫外檢測器時，溶劑要不吸收紫外光。也不發(fā)生不可逆反應(yīng)。 液相色譜流動相 （ 1）能溶解樣品，但不能與樣品發(fā)生反應(yīng)。 選擇合適的固定相，降低填料粒度可顯著提高柱效，但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項技術(shù)要求非常高的工作，一般很少自行制備。但在實際操作中，流量仍是一個調(diào)整分離度和出峰時間的重要可選擇參數(shù)。 1. 影響分離的因素 —— 流速 流速大于 cm/s時 , H～ u曲線是一段斜率不大的直線。與示差折光檢測器相比，它的基線漂移不受溫度影響，信噪比高，也可用于梯度洗脫。適合于無紫外吸收、無電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測。由霧化器、加熱漂移管、激光光源和光檢測器等部件構(gòu)成?；窘Y(jié)構(gòu)是在柱流出液中放置兩根電極，然后通過適當(dāng)?shù)碾娮泳€路測量溶液的電導(dǎo)。 電導(dǎo)池是其核心。 電導(dǎo)檢測器（ conductivity detector,
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