高效液相色譜ppt課件(2)-資料下載頁
2025-01-15 17:31本頁面
【正文】 pyl Paraben) ③ 對羥基苯甲酸丁酯 (Butyl Paraben) 改變?nèi)萘恳蜃? K39。 60/4050/50 40/60①②③①② ②③ ③①譜圖 改變選擇性 ∶ a ?通過改變流動相改變選擇性 – 同樣強度的不同溶劑 ?改變色譜柱 ①②③ 62:38/ 42:58/72:28/2322，③，②，①OHCNCHOHM e O HOHTHF離子型化合物的分離方式 ?使用離子交換柱 ∶ 離子交換法 – 主要用于“強”陰、陽離子 ?使用反相柱 – 離子抑制色譜法 ? 通過改變流動相的 pH值，使樣品成中性 – 離子對色譜法 ? 加入“對離子”，使樣品呈中性 離子抑制色譜 ?離子型化合物在反相色譜柱上不保留 ?改變流動相的 pH值，抑制樣品離子的電離 ?適用于弱酸性化合物的分離 – 降低流動相的 pH值，使樣品降低離子化 ?使用條件應(yīng)在填料基質(zhì)的范圍內(nèi) – 硅膠柱的 pH在 28（較保險值 37）內(nèi) 常用緩沖液及其 pH值 離子抑制色譜實例 ? 在乙腈 /水及 pH=7時， 多數(shù)保留時間很短，無 法完全分離。 C H OO HO C H 3C O O N a C H O C O O HO C H 31 2 3 4離子抑制色譜的使用范圍 如果： 一些酸在 pH低于 2時還保持離子化 一些堿在 pH高于 7時還保持離子化 ?可以有以下的選擇 – 離子交換色譜 – 使用聚合物反相柱，在 pH高于 7時用離子抑制法 – 使用“離子對色譜法” 離子對色譜法 ?在反相色譜流動相內(nèi)加入“離子對”試劑 – 與樣品中可電離的組份形成“對離子” – 在反相色譜柱上分離離子型化合物 ?離子對試劑的類型 – PIC A：磷酸季丁銨，適用于弱酸 – PIC B：烷基磺酸鹽，適用于弱堿 離子對色譜機理 結(jié)論 ?充分用已知樣品結(jié)構(gòu)確定以哪種方法開始 – 普通反相 ? 離子抑制 ? 離子對 ? 還是其他 ?觀察流動相條件改變時色譜峰的移動 – 根據(jù)變化的方向及大小決定下一步干什么 ?改變參數(shù)時要合理，每次只改動其中一個變量！ ?色譜柱的改變影響最大 毛細管電泳 以高壓電場為驅(qū)動力，以電解質(zhì)為電泳介質(zhì)，以毛細管為分離通道，樣品組分依據(jù)淌度和分配行為的差異而實現(xiàn)分離的一種色譜方法。它有多種分離模式，可以采用液相色譜中的各種檢測方法。 CE既可以分離帶電荷的溶質(zhì)，也可以通過毛細管膠束電動色譜等分離模式分析中性溶質(zhì)， CE的高分離效率、高檢測靈敏度，樣品用量極少等特點使它在生物醫(yī)藥樣品的分析中顯示出突出的優(yōu)越性。 毛細管電色譜 以電滲流（或電滲流結(jié)合高壓輸液泵）為流動相驅(qū)動力的微柱色譜法。是液相色譜與毛細管電泳相結(jié)合的產(chǎn)物，它的分離機理包含有電泳遷移和色譜固定相的保留機理，一般而言，溶質(zhì)與固定相間的相互作用對分離起主導(dǎo)作用。所用色譜柱為填充了 HPLC填料的填充型毛細管柱和管內(nèi)壁涂漬了固定相功能分子的開管毛細管柱。 CEC還處在發(fā)展階段，目前主要應(yīng)用在藥物、手性化合物和多環(huán)芳烴的分離分析。另外 CEC與質(zhì)譜聯(lián)用既可解決 LC/MS的分離效率不高的問題，又可克服 CE/MS中質(zhì)量流量太小的缺陷。 習(xí) 題 在 2m長 20%DNP柱上 ， 苯和環(huán)己烷的保留時間分別為 185s和 175s， 半峰寬分別為 ， 記錄儀走紙速度為 600mm/h，如果要使兩組分的分離度 R=， 色譜柱至少需長多少米 ？ 提示：首先求分離度 R1/2，計算時注意單位一致，將半寬度換算用時間 s表示，因走紙速度為 600nm/h = 600mm/3600s = 1mm/6s 解： ? ?? ?? ?? ?? ? ? ?? ?? ? ? ?? ?? ?? ? ? ?mmLRLRRLYYttRststssmmmmYssmmmmYRRRR:/175185221751856/16/1222121222/12/112/121?????????????????????色譜柱至少須增長當分離度環(huán)苯環(huán)苯環(huán)苯環(huán)己烷苯?習(xí) 題 與氣相色譜法相比高效液相色譜有哪些優(yōu)點和不足？ 解： 一、氣相色譜的分析對象是在柱溫下具有一定的揮發(fā)性、對熱穩(wěn)定的物質(zhì)。因此它只限于分析氣體和沸點低的化合物或揮發(fā)性的衍生物。而高效液相色譜由于以液體作為流動相，只要被分析的物質(zhì)在選用的流動相中有一定的溶解度，便可以分析，所以適用性廣，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，特別適合于那些沸點高、極性強、熱穩(wěn)定性差的化合物，例如，生化物質(zhì)和藥物、離子型化合物、熱穩(wěn)定性差的天然產(chǎn)物等。在目前已知的有機化合物中，只有 20%樣品可不經(jīng)化學(xué)處理而能滿意地用氣相色譜分離， 80%的有機化合物要用高效液相色譜分析。 二、氣相色譜中流動相是惰性的，它對組分沒有作用力，僅起運載作用，而高效液相色譜的流動相不僅起運載作用，而且流動相對組分有一定親合力，可以通過改變流動相種類和組成提高分離的選擇性，另外可作流動相的化合物多，選擇余地廣。 三、與氣相色譜相比，高效液相色譜的另一個優(yōu)點是樣品的回收比較容易，只要開口容器放在柱子末端，就可以很容易地將所分離的各組分收集?；厥帐嵌康?，可以用來提純和制備具有足夠純度的單一物質(zhì)。 四、高效液相色譜不足的是，目前檢測器的靈敏度不及氣相色譜。必須特別注意“ 柱外效應(yīng) ”對柱效率及色譜分離的影響。
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