高效液相色譜ppt課件(2)-資料下載頁(yè)
2025-01-15 17:31本頁(yè)面
【正文】 pyl Paraben) ③ 對(duì)羥基苯甲酸丁酯 (Butyl Paraben) 改變?nèi)萘恳蜃? K39。 60/4050/50 40/60①②③①② ②③ ③①譜圖 改變選擇性 ∶ a ?通過(guò)改變流動(dòng)相改變選擇性 – 同樣強(qiáng)度的不同溶劑 ?改變色譜柱 ①②③ 62:38/ 42:58/72:28/2322，③，②，①OHCNCHOHM e O HOHTHF離子型化合物的分離方式 ?使用離子交換柱 ∶ 離子交換法 – 主要用于“強(qiáng)”陰、陽(yáng)離子 ?使用反相柱 – 離子抑制色譜法 ? 通過(guò)改變流動(dòng)相的 pH值，使樣品成中性 – 離子對(duì)色譜法 ? 加入“對(duì)離子”，使樣品呈中性 離子抑制色譜 ?離子型化合物在反相色譜柱上不保留 ?改變流動(dòng)相的 pH值，抑制樣品離子的電離 ?適用于弱酸性化合物的分離 – 降低流動(dòng)相的 pH值，使樣品降低離子化 ?使用條件應(yīng)在填料基質(zhì)的范圍內(nèi) – 硅膠柱的 pH在 28（較保險(xiǎn)值 37）內(nèi) 常用緩沖液及其 pH值 離子抑制色譜實(shí)例 ? 在乙腈 /水及 pH=7時(shí)， 多數(shù)保留時(shí)間很短，無(wú) 法完全分離。 C H OO HO C H 3C O O N a C H O C O O HO C H 31 2 3 4離子抑制色譜的使用范圍 如果： 一些酸在 pH低于 2時(shí)還保持離子化 一些堿在 pH高于 7時(shí)還保持離子化 ?可以有以下的選擇 – 離子交換色譜 – 使用聚合物反相柱，在 pH高于 7時(shí)用離子抑制法 – 使用“離子對(duì)色譜法” 離子對(duì)色譜法 ?在反相色譜流動(dòng)相內(nèi)加入“離子對(duì)”試劑 – 與樣品中可電離的組份形成“對(duì)離子” – 在反相色譜柱上分離離子型化合物 ?離子對(duì)試劑的類(lèi)型 – PIC A：磷酸季丁銨，適用于弱酸 – PIC B：烷基磺酸鹽，適用于弱堿 離子對(duì)色譜機(jī)理 結(jié)論 ?充分用已知樣品結(jié)構(gòu)確定以哪種方法開(kāi)始 – 普通反相 ? 離子抑制 ? 離子對(duì) ? 還是其他 ?觀察流動(dòng)相條件改變時(shí)色譜峰的移動(dòng) – 根據(jù)變化的方向及大小決定下一步干什么 ?改變參數(shù)時(shí)要合理，每次只改動(dòng)其中一個(gè)變量！ ?色譜柱的改變影響最大 毛細(xì)管電泳 以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，以電解質(zhì)為電泳介質(zhì)，以毛細(xì)管為分離通道，樣品組分依據(jù)淌度和分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一種色譜方法。它有多種分離模式，可以采用液相色譜中的各種檢測(cè)方法。 CE既可以分離帶電荷的溶質(zhì)，也可以通過(guò)毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜等分離模式分析中性溶質(zhì)， CE的高分離效率、高檢測(cè)靈敏度，樣品用量極少等特點(diǎn)使它在生物醫(yī)藥樣品的分析中顯示出突出的優(yōu)越性。 毛細(xì)管電色譜 以電滲流（或電滲流結(jié)合高壓輸液泵）為流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力的微柱色譜法。是液相色譜與毛細(xì)管電泳相結(jié)合的產(chǎn)物，它的分離機(jī)理包含有電泳遷移和色譜固定相的保留機(jī)理，一般而言，溶質(zhì)與固定相間的相互作用對(duì)分離起主導(dǎo)作用。所用色譜柱為填充了 HPLC填料的填充型毛細(xì)管柱和管內(nèi)壁涂漬了固定相功能分子的開(kāi)管毛細(xì)管柱。 CEC還處在發(fā)展階段，目前主要應(yīng)用在藥物、手性化合物和多環(huán)芳烴的分離分析。另外 CEC與質(zhì)譜聯(lián)用既可解決 LC/MS的分離效率不高的問(wèn)題，又可克服 CE/MS中質(zhì)量流量太小的缺陷。 習(xí) 題 在 2m長(zhǎng) 20%DNP柱上 ， 苯和環(huán)己烷的保留時(shí)間分別為 185s和 175s， 半峰寬分別為 ， 記錄儀走紙速度為 600mm/h，如果要使兩組分的分離度 R=， 色譜柱至少需長(zhǎng)多少米 ？ 提示：首先求分離度 R1/2，計(jì)算時(shí)注意單位一致，將半寬度換算用時(shí)間 s表示，因走紙速度為 600nm/h = 600mm/3600s = 1mm/6s 解： ? ?? ?? ?? ?? ? ? ?? ?? ? ? ?? ?? ?? ? ? ?mmLRLRRLYYttRststssmmmmYssmmmmYRRRR:/175185221751856/16/1222121222/12/112/121?????????????????????色譜柱至少須增長(zhǎng)當(dāng)分離度環(huán)苯環(huán)苯環(huán)苯環(huán)己烷苯?習(xí) 題 與氣相色譜法相比高效液相色譜有哪些優(yōu)點(diǎn)和不足？ 解： 一、氣相色譜的分析對(duì)象是在柱溫下具有一定的揮發(fā)性、對(duì)熱穩(wěn)定的物質(zhì)。因此它只限于分析氣體和沸點(diǎn)低的化合物或揮發(fā)性的衍生物。而高效液相色譜由于以液體作為流動(dòng)相，只要被分析的物質(zhì)在選用的流動(dòng)相中有一定的溶解度，便可以分析，所以適用性廣，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，特別適合于那些沸點(diǎn)高、極性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性差的化合物，例如，生化物質(zhì)和藥物、離子型化合物、熱穩(wěn)定性差的天然產(chǎn)物等。在目前已知的有機(jī)化合物中，只有 20%樣品可不經(jīng)化學(xué)處理而能滿意地用氣相色譜分離， 80%的有機(jī)化合物要用高效液相色譜分析。 二、氣相色譜中流動(dòng)相是惰性的，它對(duì)組分沒(méi)有作用力，僅起運(yùn)載作用，而高效液相色譜的流動(dòng)相不僅起運(yùn)載作用，而且流動(dòng)相對(duì)組分有一定親合力，可以通過(guò)改變流動(dòng)相種類(lèi)和組成提高分離的選擇性，另外可作流動(dòng)相的化合物多，選擇余地廣。 三、與氣相色譜相比，高效液相色譜的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是樣品的回收比較容易，只要開(kāi)口容器放在柱子末端，就可以很容易地將所分離的各組分收集?；厥帐嵌康?，可以用來(lái)提純和制備具有足夠純度的單一物質(zhì)。 四、高效液相色譜不足的是，目前檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。必須特別注意“ 柱外效應(yīng) ”對(duì)柱效率及色譜分離的影響。
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