高效液相色譜ppt課件(2)(參考版)
2025-01-18 17:31本頁(yè)面
【正文】 必須特別注意“ 柱外效應(yīng) ”對(duì)柱效率及色譜分離的影響?；厥帐嵌康?，可以用來(lái)提純和制備具有足夠純度的單一物質(zhì)。 二、氣相色譜中流動(dòng)相是惰性的，它對(duì)組分沒(méi)有作用力，僅起運(yùn)載作用，而高效液相色譜的流動(dòng)相不僅起運(yùn)載作用，而且流動(dòng)相對(duì)組分有一定親合力，可以通過(guò)改變流動(dòng)相種類和組成提高分離的選擇性，另外可作流動(dòng)相的化合物多，選擇余地廣。而高效液相色譜由于以液體作為流動(dòng)相，只要被分析的物質(zhì)在選用的流動(dòng)相中有一定的溶解度，便可以分析，所以適用性廣，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，特別適合于那些沸點(diǎn)高、極性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性差的化合物，例如，生化物質(zhì)和藥物、離子型化合物、熱穩(wěn)定性差的天然產(chǎn)物等。 習(xí) 題 在 2m長(zhǎng) 20%DNP柱上 ， 苯和環(huán)己烷的保留時(shí)間分別為 185s和 175s， 半峰寬分別為 ， 記錄儀走紙速度為 600mm/h，如果要使兩組分的分離度 R=， 色譜柱至少需長(zhǎng)多少米 ？ 提示：首先求分離度 R1/2，計(jì)算時(shí)注意單位一致，將半寬度換算用時(shí)間 s表示，因走紙速度為 600nm/h = 600mm/3600s = 1mm/6s 解： ? ?? ?? ?? ?? ? ? ?? ?? ? ? ?? ?? ?? ? ? ?mmLRLRRLYYttRststssmmmmYssmmmmYRRRR:/175185221751856/16/1222121222/12/112/121?????????????????????色譜柱至少須增長(zhǎng)當(dāng)分離度環(huán)苯環(huán)苯環(huán)苯環(huán)己烷苯?習(xí) 題 與氣相色譜法相比高效液相色譜有哪些優(yōu)點(diǎn)和不足？ 解： 一、氣相色譜的分析對(duì)象是在柱溫下具有一定的揮發(fā)性、對(duì)熱穩(wěn)定的物質(zhì)。 CEC還處在發(fā)展階段，目前主要應(yīng)用在藥物、手性化合物和多環(huán)芳烴的分離分析。是液相色譜與毛細(xì)管電泳相結(jié)合的產(chǎn)物，它的分離機(jī)理包含有電泳遷移和色譜固定相的保留機(jī)理，一般而言，溶質(zhì)與固定相間的相互作用對(duì)分離起主導(dǎo)作用。 CE既可以分離帶電荷的溶質(zhì)，也可以通過(guò)毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜等分離模式分析中性溶質(zhì)， CE的高分離效率、高檢測(cè)靈敏度，樣品用量極少等特點(diǎn)使它在生物醫(yī)藥樣品的分析中顯示出突出的優(yōu)越性。 C H OO HO C H 3C O O N a C H O C O O HO C H 31 2 3 4離子抑制色譜的使用范圍 如果： 一些酸在 pH低于 2時(shí)還保持離子化 一些堿在 pH高于 7時(shí)還保持離子化 ?可以有以下的選擇 – 離子交換色譜 – 使用聚合物反相柱，在 pH高于 7時(shí)用離子抑制法 – 使用“離子對(duì)色譜法” 離子對(duì)色譜法 ?在反相色譜流動(dòng)相內(nèi)加入“離子對(duì)”試劑 – 與樣品中可電離的組份形成“對(duì)離子” – 在反相色譜柱上分離離子型化合物 ?離子對(duì)試劑的類型 – PIC A：磷酸季丁銨，適用于弱酸 – PIC B：烷基磺酸鹽，適用于弱堿 離子對(duì)色譜機(jī)理 結(jié)論 ?充分用已知樣品結(jié)構(gòu)確定以哪種方法開(kāi)始 – 普通反相 ? 離子抑制 ? 離子對(duì) ? 還是其他 ?觀察流動(dòng)相條件改變時(shí)色譜峰的移動(dòng) – 根據(jù)變化的方向及大小決定下一步干什么 ?改變參數(shù)時(shí)要合理，每次只改動(dòng)其中一個(gè)變量！ ?色譜柱的改變影響最大 毛細(xì)管電泳 以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，以電解質(zhì)為電泳介質(zhì)，以毛細(xì)管為分離通道，樣品組分依據(jù)淌度和分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一種色譜方法。 148 色譜分離方法的選擇 液相色譜的方法開(kāi)發(fā) 第一步干什么 ? ?想辦法得到各種信息 – 向同行了解是否做過(guò)此類樣品，或有否類似樣品的分析方法 – 查文獻(xiàn)，如 CA(化學(xué)文摘 ) ?對(duì)色譜柱有足夠的了解 – 掌握分離機(jī)理，自己開(kāi)發(fā)方法 ?充分了解您自己的樣品 分析時(shí)要了解哪方面的情況？ ?靈敏度的要求有多高 ? ?樣品的本底是否很復(fù)雜 ? ?有多少組份要分析 ? ?對(duì)分析的精密度、準(zhǔn)確度等有多高要求 ? ?是否因是日常檢驗(yàn)，而要求方法容易使用 ? 分離時(shí)要了解哪方面的情況？ ?要分離（即制備）的樣品量有多大 ? ?要分離的組份在樣品中的含量很高 ? 還是微量 ? ?是否需要保持生物活性 ? ?對(duì)分離產(chǎn)物純度的要求有多高 ? ?純度或活性的鑒定如何完成 ? 一般的具體步驟 ?先用一根短的色譜柱 ?用相對(duì)較高的流速 ?使用盡可能純度高的標(biāo)準(zhǔn)品 ?先用高強(qiáng)度的洗脫液 ?調(diào)節(jié)柱長(zhǎng)度改變柱效及分離速度 請(qǐng)記住∶ 每次改變一個(gè)參數(shù)使用文獻(xiàn)方法 ?色譜柱填料的種類、品牌是否相同 ? ?注意文獻(xiàn)方法的流動(dòng)相 – 是否損害色譜柱 ? – 如色譜填料品牌不同，需要調(diào)整流動(dòng)相 ?注意色譜柱的規(guī)格：內(nèi)徑、柱長(zhǎng) – 需要調(diào)整流速、進(jìn)樣量 反相色譜的方法開(kāi)發(fā) ?開(kāi)發(fā)過(guò)程實(shí)例 – 色譜條件 ∶ ? 色譜柱： C18， 4mm 30mm ? 流動(dòng)相：乙腈 /水，不同的溶劑強(qiáng)度， 60/50/50、 40/60，由強(qiáng)漸弱 ? 流速： 1ml/min – 樣品： ① 對(duì)羥基苯甲酸甲酯 (Methyl Paraben) ② 對(duì)羥基苯甲酸丙酯 (Propyl Paraben) ③ 對(duì)羥基苯甲酸丁酯 (Butyl Paraben) 改變?nèi)萘恳蜃? K39。此外，排阻色譜越來(lái)越多的應(yīng)用是通過(guò)測(cè)量相對(duì)分子質(zhì)量分布來(lái)鑒定高聚物及研究高聚物聚合機(jī)理、聚合工藝、條件等。如甲苯和四氫呋喃能很好地溶解合成高分子，所以 GPC主要用于合成高分子的分子量（分布）的測(cè)定。 凝膠滲透色譜 ： 以有機(jī)溶劑作流動(dòng)相的凝膠色譜法。 凝膠過(guò)濾色譜 ： 以水
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