高效液相色譜hplc簡介-文庫吧資料
2025-05-06 18:19本頁面
【正文】 如非水性凝膠色譜的流動相不必脫氣 ， 反相色譜的流動相需要脫氣 。 ? 貯液瓶要不定期更換 ， 要有 2～ 3個備用瓶 ， 定期用酸 、 水 、 溶劑清洗 。 ? 溶劑過濾：常用 。貯液并內(nèi)要放置燒結(jié)不銹鋼過濾器，即沉子，孔徑為 10μ m，其作用是：①防止灰塵進(jìn)入泵缸。 當(dāng)流動相粘度增加時 ， 塔板數(shù)會降低 ， 對于反相體系 ， 水的粘度較高意味著在高溫時操作有利于最大限度的增大塔板數(shù) ， 在 50度時較好 。 ? 溫度的選擇性 ， 溫度的變化會影響分離度 。 確定最佳的溶劑強(qiáng)度 ? ―試 湊法 ” ， 即先用一種可能過強(qiáng)的流動相 ， 在后面的實(shí)驗中逐步減小溶劑強(qiáng)度以增加 k’， 當(dāng)所有譜峰的 k’介于 1—20時 ， 其流動相已經(jīng)接近最佳了 。 N 是理論塔板數(shù)，描述色譜峰的譜帶展寬程度。 N∶ 如何控制分離度 ? K′是容量因子，表達(dá)了被分離組分與柱填料的作用強(qiáng)弱。 ? ⑧廢液易處理，不污染環(huán)境 提高柱效的方法 ? 固定相填料要均一，顆粒細(xì)，裝填均勻 ? 流動相粘度低 ? 低流速 ? 升高柱溫。 ? ⑥無毒或低毒，易于操作。 ? ④粘度低，流動性好。 ? ②化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不損壞柱子。 常用的反向填料有： C18（ ODS）、 C8（ MOS）、 C4（ Butyl）、 C6H5（ Phenyl）等。反向色譜所使用的流動相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如正已烷，氯仿，二氯甲烷等。 液相色譜類型 色譜柱簡介 ? 正相柱 固定相通常為硅膠以及其他具有極性官能團(tuán)胺基團(tuán)，如（ NH2）和氰基團(tuán)（ CN）的鍵合相填料。 ? 反相色譜：固定相為非極性 ， 流動相為極性 。 反相鍵合相色譜柱最常用的就是 ODS柱，也就是 C18柱。 高效液相色譜法的主要類型及原理 液 液分配色譜 液 固吸附色譜 離子交換色譜 離子對色譜 離子色譜 排阻色譜 親和色譜 (AC) 液 液分配色譜 固定相與流動相均為液體（互不相溶）； 基本原理：組分在固定相和流動相上的分配； 流動相：對于親水性固定液，采用疏水性流動相，即流動相的極性小于固定液的極性（正相 normal phase），反之，流動相的極性大于固定液的極性（反相 reverse phase）。 液相色譜分析法的特點(diǎn) 在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，實(shí)現(xiàn)了分析速度快、分離效率高和操作自動化。 可變多波長檢測器：氘燈做光源，光柵分光 光二極管陣列檢測器 photo－ diode－ array detector（ PDAD， PDA, DAD）：鎢燈和氘燈組合光源，進(jìn)入檢測池的不是單色光，而是一段紫外波長上的光。 特點(diǎn)：消除了溶劑的干擾，不受溫度變化影響，靈敏度高，是通用型檢測器。色譜柱后流出物在通向檢測器途中，被高速載氣（氮?dú)猓﹪姵伸F狀液滴，再進(jìn)入蒸發(fā)漂移管中，流動相不斷蒸發(fā)，含溶質(zhì)的霧狀液滴形成不揮發(fā)的微小顆粒，被載氣載帶通過檢測器。 特點(diǎn)：選擇性檢測器、靈敏度高（ 1012g）、對流量和溫度敏感性低。適用于離子型化合物。 檢測器簡介（二） ◆ 電導(dǎo) 檢測器（ ECD） 原理：監(jiān)測溶液的電導(dǎo)率變化的檢測器。 特點(diǎn)：通用性檢測器，溫變化要保持在 177。 特點(diǎn)：選擇性檢測器、對流量和溫度敏感性低、靈敏度較高（ 109g）。 固定相 (Stationary Phase) 流動相 (Mobile Phase) 樣品 (溶解于流動相中的溶質(zhì) ) HPLC的特點(diǎn) 項 目 高效液相色譜法 氣相色譜法 進(jìn)樣方式 樣品制成溶液 樣品需氣化或裂解 流動相 溶液 惰性氣體 分離原理 吸附、分配、篩析、親和等 吸附和分配 檢測器 UVD、 PDAD、 RID等 TCD、 FID、 ECD等 應(yīng)用范圍 低、中、高沸點(diǎn)有機(jī)化合物 離子型無機(jī)化合物 熱不穩(wěn)定化合物 生物活性分子 低沸點(diǎn)有機(jī)化合物 永久性氣體 高效液相色譜儀構(gòu)造 HPLC的儀器配置及流程 色譜泵及控制器 數(shù)據(jù)處理及控制進(jìn)樣器色譜柱檢測器Waters 486檢測器簡介（一） ◆ 紫外吸收
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