【正文】 W— 取樣量。 V1— 滴定餾出液時(shí)消耗鹽酸的體積。同時(shí)，做空白蒸餾測(cè)定。 (6) 排液、洗滌 (4) 用移液管取 2mL消化液，由小漏斗加入反應(yīng)室再 用移液管從漏斗中加入 10mL 40%NaOH，用 少量水沖洗漏斗后，加夾，液封。 2022/2/11 54 （ 2）蒸餾與吸收 (1)、蒸餾器的洗滌 (2)、小三角瓶瓶?jī)?nèi)加 5mL4%硼酸， 1滴指示劑 (粉紅色 ) (3)、安好蒸餾裝置 (下端插入三角瓶液面下 )。 （ 1）試樣的消化 沿凱氏瓶壁以傾斜方式緩慢倒入 100mLH2O于凱氏瓶中，稀釋消化液。 2022/2/11 50 1. 方法原理 （ 1）試樣經(jīng)濕法消化： 蛋白質(zhì) 酸水解 催化劑 NH3 NH3+H2SO4 (NH4)2SO4 (２ )堿化蒸餾 NH4+ NH3 NaOH 2022/2/11 51 (3)吸收 2NH3+H2SO4=(NH4)2SO4 用硫酸接收 2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O 用硼酸接收 (4)滴定 H2SO4接收，過量 H2SO4用 NaOH滴定 H3BO3接收，用 H2SO4或 HCl直接滴定 (NH4)2B4O7+5H2O＋ 2HCl＝ 2NH4Cl+4H3BO4 2022/2/11 52 2. 試劑 濃硫酸 CuSO4 K2SO4 40%NaOH 4%硼酸吸收液：稱 20g硼酸溶于 500mL熱水中 。 2022/2/11 49 原料中粗蛋白質(zhì)的測(cè)定 通過這種方法測(cè)得的是試樣中總氮的含量，它除了蛋白質(zhì)中的氮以外，還包括少量氨基酸、酰胺、核酸、維生素等非蛋白質(zhì)有機(jī)氮，再換算成蛋白質(zhì)，因此稱為粗蛋白。 常量凱式定氮法 常量凱氏定氮法是將樣品分解消化后的消化液全部用于測(cè)定，取樣量大，測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精確度都很高。 化學(xué)法 折射率測(cè)定 紫外分光光度法 旋光法 。 發(fā)酵飼料 ， 則蛋白含量越高越好 。 2022/2/11 46 五 、 結(jié)果計(jì)算 粗淀粉 (%)= F m V/250 1000 100% 式中： F— 10毫升斐林試劑相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖 質(zhì)量， mg m— 樣品質(zhì)量， g v— 測(cè)定時(shí)平均消耗樣品溶液的體積， mL — 葡萄糖換算成淀粉的系數(shù) 2022/2/11 47 167。 2022/2/11 45 樣品溶液的測(cè)定 吸取斐林試劑甲、乙液各 5毫升，置于 250毫升錐形瓶中，加 20毫升水，從滴定管中加入 (V11)毫升樣品溶液，加熱使其在 2分鐘內(nèi)沸騰，保持 2分鐘，加 2滴次甲基蘭溶液，趁熱以每 2秒一滴的速度滴加樣液，直至藍(lán)色消失為終點(diǎn)。 2022/2/11 44 樣品溶液預(yù)測(cè) 吸取斐林試劑甲、乙液各 5毫升，置于 250毫升錐形瓶中，加 20毫升水，加熱使其在 2分鐘內(nèi)沸騰，保持 2分鐘，加 2滴次甲基蘭溶液，趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣液，待溶液藍(lán)色變淺時(shí)，以每 2秒一滴的速度滴加樣液，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。在電爐上加熱至沸騰，保持 15min，取下迅速冷卻，加入 20%氫氧化鈉溶液，中和至 pH值 57，將溶液過濾于 250ml容量瓶中，再將錐形瓶?jī)?nèi)殘?jiān)谜麴s水沖洗 23次，過濾，定容，濾液為供檢糖液。 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：準(zhǔn)確稱取 4g無水葡萄糖， 用水溶解，加 5毫升濃鹽酸，用水定容到 1000毫升。 斐林乙液：稱取 346g酒石酸鉀鈉和 100gNaOH，加 水溶解并稀釋至 1000毫 升。 愛農(nóng)法測(cè)定還原糖的基本原理及方法 在熱源上進(jìn)行滴定操作訓(xùn)練 2022/2/11 40 二 、 實(shí)驗(yàn)原理 淀粉水解 (C6H10O5)n + H2O nC6H12O6 酸或酶 斐林試劑 氧化還原反應(yīng) 滴定終點(diǎn) 次甲基藍(lán)為指示劑，終點(diǎn)時(shí)由藍(lán)色到無色 2022/2/11 41 三 、 儀器 、 試劑 5%鹽酸溶液 20%氫氧化鈉溶液 斐林甲液：稱取 (CuSO4由于此法不僅能水解多糖類，而且也能把半纖維，多縮戊糖，果膠質(zhì)等水解為葡萄糖和戊糖，所以測(cè)定結(jié)果為粗淀粉含量。 2022/2/11 38 碘量法測(cè)糖原理 （ 1） 醛基被弱氧化劑次碘酸鈉氧化 I2 + 2NaOH=NaIO + NaI + H2O NaIO + CH2OH (CHOH)4 C H O (CHOH)4 CH2OH COOH + NaI （ 2） 過量的碘用硫代硫酸鈉滴定 I2 + 2Na2S2O3=Na2S4O6 + 2NaI 2022/2/11 39 實(shí)驗(yàn)一 、 原料中粗淀粉的測(cè)定 (蘭 醛 、 酮都能測(cè)定 。 有 重量法 (通過測(cè)定 Cu2O重量 ， 求出糖含量 )；容量法 (方法很多 ， 典型方法是直接用被測(cè)糖液滴定一定體積的斐林試劑 ， 以次甲基藍(lán)為指示劑 ， 稱蘭 愛農(nóng)法 ， 還有將生成的 Cu2O沉淀溶解 ， 用碘量法或高錳酸鉀法測(cè)定 )； 比色法 (將 Cu2O還原雜多酸 、 磷鉬酸 、 砷鉬酸 ， 生成蘭色物質(zhì) ， 以比色法測(cè)定 )。 COOK CHO CHO COONa Cu COOK CHOH CHOH COONa Cu(OH)2 + = + 2H2O CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4 2022/2/11 35 （ 2） 氧化還原反應(yīng)： 酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物中 ， 二價(jià)銅是個(gè)氧化劑 ， 能使還原糖中羰基氧化 ， 而二價(jià)銅被還原成一價(jià)的氧化銅沉淀 。 化學(xué)法主要是利用單糖中游離的羰基具有還原性利用氧化還原反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定 。 沒有游離羰基的蔗糖 ， 可以用稀酸水解 ， 轉(zhuǎn)化成單糖而使其具有還原性 ， 具有還原性的游離羰基與一定的氧化劑 ， 氧化劑可以使游離的羰基氧化 ， 將醛糖 、 酮糖氧化為相應(yīng)的酸類 ， 化學(xué)法測(cè)定糖類 ， 就是利用這種氧化 還原反應(yīng)完成的 。 2022/2/11 33 所有的單糖都具有游離的羰基 （ 醛基或酮基 ） ， 稱為還原糖 。 發(fā)酵過程中糖量的變化， 可以衡量發(fā)酵是否正常 ， 掌握 、 控制工藝 。 3 糖類的測(cè)定 糖類是微生物所需要的主要碳源 ， 工業(yè)發(fā)酵中的糖類主要有淀粉 ， 糊精 ， 雙糖 ， 單糖等 。 1. 原理 一定量試樣在一定溫度下烘干一定時(shí)間 ， 使其中相當(dāng)數(shù)量的水分揮發(fā)逸失 ， 水分達(dá)到正常含量時(shí) ， 試樣進(jìn)行制備并達(dá)到一定細(xì)度 ， 烘干至恒重 ， 由兩次烘干的樣品逸失量 ， 計(jì)算水分的百分含量 。 ， 常用的一些含水分較低的產(chǎn) 品 ， 如活性干酵母 ， 其水分測(cè)定時(shí)應(yīng)注意拆封后 及時(shí)測(cè)定 ， 以免吸濕 。 、 醇、有機(jī)酸等揮發(fā)性物質(zhì)。 如此反復(fù)操作 ， 至前后兩次質(zhì)量差不超過 2mg,即為恒量 W2。 2022/2/11 28 （ 3） 樣品干燥： 取一定樣品加入已知重量的稱量瓶?jī)?nèi) ，準(zhǔn)確稱重 ， 記為 W1， 樣品厚度不宜超過 5mm， 置 95105℃ 烘箱內(nèi) ， 瓶蓋斜支于瓶邊 ， 干燥 24小時(shí)后 ， 蓋好取出 ， 放入干燥器內(nèi)冷卻 30分鐘后稱量 。 （ 2） 樣品制備： 為保證樣品中的水分能迅速揮發(fā)逸出 ， 一般樣品都要進(jìn)行制備 ， 經(jīng)過粉碎 、 混勻 、 分取等過程 ， 使樣品達(dá)到相應(yīng)的要求 。 1. 原理 2022/2/11 27 3. 分析步驟 （ 1） 稱量瓶處理： 取潔凈玻璃稱量瓶 ,置于 95105℃烘箱中 ,瓶蓋斜支于瓶邊 ,加熱 ,取出蓋好 。 工業(yè)發(fā)酵用的谷物原料玉米 、 豆粕 、 小麥 、 大米 、 大麥和高梁等的水分測(cè)定常采用常壓干燥法 。 2 水分的測(cè)定 極重要的分析項(xiàng)目 ， 物料中含水量 ， 對(duì)其品質(zhì) 、保存關(guān)系很大 ， 在白酒生產(chǎn)中 ， 入池酒醅水分高低， 直接影響白酒質(zhì)量 (50％ 55％ )。因此，一般分析中多采用濕法消化。 可加澄清劑澄清脫色 ， 常用的澄清劑有堿性乙酸鉛和中性乙酸鉛等 。 2022/2/11 24 3. 濕法消化 濕法消化是將試樣與濃酸共熱分解 ， 常用的濃酸有 H2SO HNO HClO HCl、 H2O2等 。 器皿： 坩堝常用瓷的 ， 溫度驟變易裂；鉑金的 ， 不能測(cè)含