【正文】 L 容量瓶中，加入 50 mL 色譜甲醇超聲溶解，再以色譜甲醇補足至刻度，搖勻后以 181。流速 : mL/min；進樣量 :20181。 (1) 液相條件 島津 LC20AHPLC， SPD20AUV 檢測器，自動進樣器；迪馬色譜分析分析柱 (250 mm5 181。目前，國外正在開發(fā)以鞣花酸為原料的保健食品與藥物?？傸S酮含量以蘆丁當量(rutin equivaLent, RE)表示。 (2) 石榴皮提取液的總黃酮含量測定（果皮提取液稀釋 10 倍）。 510 nm 下，讀取 OD 值 [23]。6H2O 溶液， 5 min后，加 2 mL of 1 M NaOH，蒸餾水補至終體積 5 mL。該標準液濃度為 mg/mL[22]。 總黃酮測定 TFC 測定 黃酮母核中含有堿性氧原子，一般又多 帶酚羥基，能與鋁離子，產(chǎn)生黃色絡(luò)合物，又加入 NaNO2和 NaOH 溶液，使在堿性溶液中呈紅色，使在堿性溶液中呈紅色，溶液在 510 nm 處有最大吸收，顯色反應(yīng)在 60min 內(nèi)穩(wěn)定 [21]。 (2) 石榴皮提取液的總酚含量測定（ 取果皮原液稀釋 30 倍） 用移液槍精確量取稀釋好的樣品溶液 mL 于 5 mL 離心管中， 按上述標準曲線制作方法測定樣品反應(yīng)液在 765 nm 波長下的吸光值 , 用回歸方程計算總酚含量 。 5min 之后，加入碳酸鈉溶液 (20 %) mL，混勻定容至 5mL。該標準液濃度為 mg/mL。藍色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比， 可用比色法測定 [19]。 北京林業(yè)大學本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 7 總酚含量測定 TPC 方法 以沒食子酸為標準品采用福林 (FoLinCiocaiLeu) 法測定石榴 皮 中總酚含量。殘渣通風櫥揮干有機溶劑 ，然后 60℃烘干 。 實驗設(shè)備 FW135 中草藥粉碎機，天津市泰斯特儀 器有限公司； 電熱恒溫水浴鍋，北京市長風儀器儀表公司； N1100DW 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器， SB1100 水浴鍋，上海愛明儀器有限公司； SHZⅢ 型循環(huán)水真空泵，上海亞榮生化儀器廠； ML104/02 電子天平，上海方瑞儀器有限公司； UV1700 紫外分光光度計，日本島津公司； LC20A 高效液相色譜儀，日本島津公司； DHG9240A 電熱鼓風干燥箱，上海恒科學儀器有限公司； TS2 搖床， KyLinBeLL Lab Instrument。 實驗試劑 無水甲醇、蒸餾水、碳酸鈉、 ALCL3 北京林業(yè)大學本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 6 2 材料與方法 實驗材料與設(shè)備 實驗材料 山東玻璃翠（ SDBLC）、山東大馬牙（ SDDMY）、山東青皮（ SDQP）、新疆和田（ XJHT）、新疆喀什（ XJKS）、新疆皮亞曼（ XJPYM） (六種石榴皮 ) 。石榴皮為石榴加工廢料 , 目前除少數(shù)藥用外 , 大多未加以利用 , 探尋石榴皮加工利用的途徑和方法 , 具有重要的社會、經(jīng)濟價值 [15]。 國內(nèi)外研究報道， 石榴皮中含有黃酮類、生物堿類、有機酸類、鞣質(zhì)類等化學成分 [14]。 石榴皮的研究進展 石榴的經(jīng)濟價值很高 ,在工業(yè)、食品、醫(yī)藥、園林綠化等多個領(lǐng)域都有重要用途。 北京林業(yè)大學本科畢業(yè)論文（設(shè)計） 5 (7) 抗老化和防曬美白 植物多酚的較強的紫外吸收在 200～ 300nm 之間 [11]，特別是對遠紫外區(qū)的吸收作用很好，還能夠阻止生成皮膚黑色素，有助于美白皮膚（趙揚帆和鄭寶東 2022）。另外，石榴皮還能減少胃潰瘍的發(fā)病率，保護胃部免受藥物和酒精等的刺激。 (4) 保護心血管系統(tǒng) 石榴皮中含有的多酚、黃酮類化合物和植物雌激素，它們具有較強的抗氧化和清除自由基活性的作用，可抑制動脈壁內(nèi)平滑肌細胞的增生和血栓的形成，減少氧化低密度脂蛋白，抑制膽固醇在體內(nèi)的合成，促進膽固醇的代謝，因而能保持人體正常的血脂水平和保證血流順暢，對人體心血管系統(tǒng)起到保護作用（李婕姝等 2022）。石榴中富含多酚類化合物具有抗氧化和清除自由基作用，可阻止多種致癌物在體內(nèi)的活化、并且阻止癌細胞的生長和多種致癌物的形成 [9]。 (2) 抗菌、抗病毒作用 體外實驗表明，石榴皮對志賀、施氏、福氏、宋氏等 [7]4 種痢疾桿菌及傷寒桿菌、結(jié)核桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、腦膜炎雙球菌、金黃色葡萄球菌等多種細菌都表現(xiàn)為抑制生長繁殖的作用（陳業(yè)高等 2022；楊麗平和楊永紅 2022），對同心性毛癬菌、堇氏毛癬菌等多種皮膚真菌也有一定 得的抑制作用（王雪莉等 2022），以上抗菌作用與所含大量多酚類物質(zhì)關(guān)系密切 [8]。 Saito Keita（ 2022）等對 1000 種中草藥的抗氧化活性進行了研究，他們發(fā)現(xiàn)石榴皮的抗氧化能力位居前四，并 且他們的研究確定了多酚是抗氧化能力的主要有效物質(zhì)。 分別以樣品濃度和自由基清除率為橫縱坐標作圖，通過相關(guān)軟件進行線性 擬合，并計算得到 IC50值。 (4) 半數(shù)抑制率 (IC50) IC50 為半數(shù)抑制濃度，即清除 50%自由基時所需抗氧化物的濃度，可以通過不同濃度的抗氧化物自由基清除率計算得到。 Fe3+TPTZ —————— Fe2+TPTZ (藍色 ) 提供了抗氧化物 TroLox 作為對照。并且由于樣品中的鐵離子或亞鐵離子的總濃度通常低于 10μM，因此樣品中的鐵離子或亞鐵離子不會顯著干擾 FRAP 法的檢測反應(yīng)。 (3) FRAP FRAP 法測定總抗氧化能力的原理是酸性條件下抗氧化物可以還原 Fe3+TPTZ 產(chǎn)生藍紫色的Fe2+TPTZ，隨后在 593nm 測定吸光度，即可作為樣品中的總抗氧化能力的指標。 TroLox 是一種維生素 E 的類似物，具有和維生素 E 相近的抗氧化能力，用作其它抗氧化物總抗氧化能力的參考。ABTS 法測定總抗氧化能力的原理是， ABTS 在適當?shù)难趸瘎┳饔孟卵趸?穩(wěn)定的藍綠 色的 ABTS?+，在抗氧化物存在時 ABTS?+的產(chǎn)生會被抑制， 二者會發(fā)生反應(yīng)并使反應(yīng)體系褪色， 在 734nm 或 405nm測定 ABTS 的吸光度即可測定并計算出樣品的總抗氧化能力。當有 自由基清除劑 存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成 定量關(guān)系 ，因而可用 分光光度計 進行快速的定量分析。 DPPH 法于 1958 年被提出，廣泛用于地量測定生物試樣、分類物質(zhì)好和食品的抗氧化能力。也常用于抗氧化成分的體外抗氧化性評價。大量使用應(yīng)穿適當?shù)姆雷o服和戴手套。般試劑含量不小于 98% 該品具有刺激性。 (1) DPPH 全稱為 1,1二苯基 2三 硝 基 苯肼 ， 分子式 :C18H12N5O6 分子量 : 暗紫色大 棱柱 形晶體。 自由基 是一種 機體氧化反應(yīng)中產(chǎn)生的有害化合物，具有強氧化性，可損害機體的組織和細胞，進而引起慢性疾病及衰老效應(yīng)。以物質(zhì)清除自由基能力為標準評價抗氧化能力的方法，因其簡單、快捷已成為目前應(yīng)用最廣的方法之一。鞣花酸表現(xiàn)出對化學物質(zhì)誘導(dǎo)癌變及其他多種癌變有明顯的抑制作用，特別是對結(jié)腸癌、食管癌、肝癌、肺癌、舌及皮膚腫瘤等有很好的抑制作用 [5]。最初這類物質(zhì)僅用于染料方面，自 20 世紀 20 年代， 槲皮素、蘆丁等黃酮類物質(zhì)用于臨床后，才開始引起人們的關(guān)注，研究發(fā)現(xiàn)其中相當一部分具有顯著的生理及藥理活性，例如抗氧化、抗病毒、抗炎、調(diào)節(jié)血管滲透性，改善記憶，抗抑郁、抗焦慮、中樞抑制、神經(jīng)保護等功能，諸多生理和藥理特性使其廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域 [4]。 黃酮類物質(zhì)是一類低分子天然植物成分，又稱生物黃酮或植物黃酮，屬植物次級代謝產(chǎn)物，廣泛存在于各種植物和大型真菌中。g1） 、蘆丁 (g1） 、槲皮素 （ g1） 、山萘素 （ g1） 、綠原酸（ 研究表明，石榴皮中含有九種多酚類成分，其中安石榴苷為主要成分，含量為 mg (2) 石榴皮的活性成分 石榴皮中含有多種生物活性成分，如不飽和脂肪酸、生育酚、多酚類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)、花青素、鞣花酸、生物堿等活性成分， 而這些活性成分與石榴皮的保健功能密切相關(guān) [2]。 石榴皮的成分 (1) 石榴的營養(yǎng)成分 石榴果實外形獨特、晶瑩剔透、酸甜可口、營養(yǎng)豐富，其中 碳水化合物、蛋白質(zhì)、各種氨基酸和人體所必需的鉀、銅、錳、鋅等多種微量元素以及維生素的含量都比較豐富。目前，石榴是國內(nèi)重點發(fā)展的水果之一，種植面積正規(guī)模化發(fā)展。 石榴主要分布在亞熱帶及溫帶地區(qū)，在我國南北各地區(qū)均有石榴種植。石榴葉加工成保健品石榴葉茶，同時，在國外已利用石榴籽的提取物加工為香精，另外，石榴中含有豐富的多酚、花青素及黃酮，其提取物可作為食品天然抗氧化劑，也用于化妝品。石榴的根、葉、花、果實、種子均可入藥。 目前石榴的栽培、深加工和產(chǎn)業(yè)化得到了迅猛發(fā)展。氣微弱，味澀。內(nèi)面鮮黃色或棕黃色，并有隆起呈網(wǎng)狀的果蒂殘痕。干燥的果皮呈不規(guī)則形或半圓形的碎片狀，厚 2～ 3 毫米。 關(guān)鍵字：石榴皮、含量測定、抗氧化活性 北京林業(yè)大學本科畢業(yè)論文（設(shè)計） II The content of free and bined with the state of poLyphenoL and antioxidant activity in Pomegranate peeL Abstract Pomegranate is a kind of punicaceae genus, Pomegranate is not onLy nutritious, but aLso rich in a variety of physioLogicaL active substances, Studies confirm pomegranate poLyphenoLs has good antioxidant, antivirus, antitumor, reguLate bLood Lipids, and other functions. And in aLL parts of pomegranate, the poLyphenoLs content pomegranate peeL is the highest. At present, the pomegranate cuLtivation, deep processing and industriaLization has made rapid deveLopment, using pomegranate as raw materiaL product research has bee a hot spot. Pomegranate pLanting area is broad in our country, which pomegranate peeL accounted for 30% of the totaL weight of pomegranate around, but in most of pomegranate juice, pomegranate wine and other food processing has been rejected, that resuLting in a waste of resources. In this subject,we seLect six different varieties of pomegranate peeL (Shandong BoLicui, Shandong Damaya, Shandong Qingpi, Xinjiang Hetian, Xinjiang Chashi, Xinjiang Piyaman). Use the forint reagent method for the determination of soLubLe poLyphenoL and bined with poLyphenoL content, determine the content of fLavonoids, high performance Liquid chromatography determine the content of eLLagic acid. And by DPPH ,ABTS and FRAP method, evaLuating the antioxidant activity of pomegranate peeL extract respectiveLy. The research resuLts show that soLubLe poLyphenoL contains 57156 mg GAE/g DW, bination state poLyphenoL content is 4565 mg GAE/g DW, fLavonoids content is 4585 mg of Rutin/g DW, eLLagic acid content is mg/g DW. Order of pomegranate peeL extract antioxidant activity is Shandong QingpiShandong DamayaXinjiang HetianXinjiang ChashiXinjiang PiyamanShandong BoLicui. Keywords: pomegranate, content determi