血清蛋白的醋酸薄膜電泳-文庫吧資料
2025-01-12 09:06本頁面
【正文】 各部分蛋白質(zhì)的分?jǐn)?shù)為： A（ 清蛋白 ） % = A / T 100 α 1球蛋白 % = α 1 / T 100 α 2球蛋白 % =α 2 / T 100 β 球蛋白 % = β / T 100 γ 球蛋白 % =γ / T 100 附：遷移率是膠體顆粒的一個物理常數(shù) ， 可用來鑒定蛋白質(zhì)等物質(zhì)以及研究它們的某些理化性質(zhì) ． 現(xiàn)將人血漿蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) ， 遷移率等列于下表 ， 供分析參考 。 下面為后者的具體操作步驟： 取試管 6支 ， 編好號碼 ， 分別用吸管取 4ml， 剪開薄膜上各條蛋白色帶 ， 另于空白部位剪一平均大小的薄膜條 ， 將各條分別浸于上述試管內(nèi) ， 不時搖動 ，使藍(lán)色洗出 。 ? 可采用洗脫法或光吸收掃描法 ， 測定各蛋白組分相對百分含量 。 ? 取出薄膜放在濾紙上 ， 用吹風(fēng)機(jī)的冷風(fēng)將薄膜吹干 。 電泳后調(diào)節(jié)旋扭使電流為零 ， 關(guān)閉電泳儀切斷電源 。 在室溫下電泳 ， 打開電源開關(guān) ， 用電泳儀上細(xì)調(diào)節(jié)旋扭調(diào)到每厘米膜寬電流強(qiáng)度為 （ 8片薄膜則為 ） 。 蓋上電泳槽蓋 ， 使薄膜平衡 10min。 圖 36 醋酸纖維素薄膜規(guī)格及點(diǎn)樣位置示意圖（虛線處為點(diǎn)樣位置） ⑶ 電泳 電泳 ? 用竹夾子將點(diǎn)樣端的薄膜平貼在陰極電泳槽支架的濾紙橋上 （ 點(diǎn)樣面朝下 ） ， 另一端平貼在陽極端支架上 ， 如圖 37所示 ， 要求薄膜緊貼濾紙橋并繃直 ，中間不能下垂 。L血清 ， 均勻涂在加樣器上 ， 再將點(diǎn)樣器輕輕印在點(diǎn)樣區(qū)內(nèi) ，如圖 36所示 ， 使血清完全滲透至薄膜內(nèi) ， 形成一定寬度 、 粗細(xì)均勻的直線 。 點(diǎn)樣區(qū)距陰極端 。 ? 用竹夾子取出浸透的薄膜 ， 夾在兩層濾紙間以吸去多余的緩沖液 。注意，取出平衡裝置時應(yīng)將活塞關(guān)緊。 ? 濾紙條是兩個電極槽聯(lián)系醋酸纖維素薄膜的橋梁 ， 因而稱為濾紙橋 。 在兩個電極槽中，各倒入等體積的電極緩沖液，在電泳槽的兩個膜支架上，各放兩層濾紙條，使濾紙一端的長邊與支架前沿對齊，另一端浸入電極緩沖液內(nèi)。 ? 將選好的薄膜用竹子輕壓 ， 使其完全浸泡于緩沖液中約 30min后 ， 方可用于電泳 。 ⑤ 定量洗脫液 （ ） ： ? 稱取 16g氫氧化鈉 （ AR） 用少量蒸餾水溶解后定容至 1000ml。 ? 乙液：取冰乙酸 （ AR） 25mL， 無水乙醇 （ AR） 75mL，混勻置試劑瓶內(nèi) ， 塞緊瓶塞 ， 備用 。 ③ 透明液：臨用前配制 。 ② 血清蛋白染色 ? 染色液 （ %氨基黑 10B） ：稱取 10B，加蒸餾水 40mL， 甲醇 （ AR） 50mL， 冰乙酸 （ AR）10mL， 混勻溶解后置具寒試劑瓶內(nèi)貯存 。 ? ⑵ 試劑 4 試劑 ① 巴比妥 巴比妥鈉緩沖液 (, , 離子強(qiáng)度 )稱取 （ AR） 和 巴比妥鈉 （ AR） ， 置于三角燒瓶中 ， 加蒸餾水約
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