【正文】 求 ④ 加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀試劑 當(dāng)溶液 pH高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時 ， 蛋白質(zhì)分子中帶陰電荷的羧基與金屬陽離子形成不溶性鹽沉淀 。 —— 為阻止酶催化生成粘蛋白 ， 應(yīng)在 4℃ 以 下保存 —— 冷凍保存唾液時 ， 解凍后應(yīng)用前搖勻 。 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 （三）生物樣品的貯藏 最常用的方法 ——冷藏 或 冷凍 冷藏 —冰箱 (4℃) 中 —短期保存 (1~2d) 冷凍 —冷柜 (20℃) 或低溫冷柜 (80℃) 中 —長期保存 ——冷藏或冷凍的時限：經(jīng)穩(wěn)定性考察后確定 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 血樣的貯藏 ——采集后及時 分離 血漿和血清 （ ≤ 2h）， 分離后置硬質(zhì)玻璃試管中或 EP管中完全密塞后 再貯存 。 尿液的采集 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 ——用于藥物劑量回收、尿清除率、生物利用度、內(nèi)源性活性物質(zhì)、藥物代謝分型及代謝物等的研究測定。 物理法 (口嚼石臘片 、 聚四氟乙烯塊或紗布球等 ) 化學(xué)法 (將檸檬酸或維生素 C等置于舌尖 )棄去初始部分后采集 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 刺激法的 優(yōu)點(diǎn) ——縮短采樣時間 ——減小唾液 pH波動（ pH≈ ） ——S/P的個體差異小 （ 2） 唾樣的制備 —— 唾樣采集后 ， 立即測量其除去泡沫部分的體積 ， 以 3000rpm離心 10min， 取上清液直接測定或冷凍保存 。 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 ——最常用的生物樣本。C or 室溫放置 30~60min 撥去血餅 血清 血漿比血清的分離快，而且制取的量約為全血的 50%~60%， 血清只為全血的 20%~40%， 多數(shù)研究者用血漿進(jìn)行分析測定。 ① 血漿（ plasma ）的制備 靜脈血 2500~3000r/min 離心 5~10min 血漿 置含抗凝劑試管中 抗凝劑： 肝素（最常用）、 EDTA、椐櫞酸鹽、草酸鈣、 氟化鈉。 （ 1）血樣的采集： 注射器 、毛細(xì)管眼眶采血、靜脈插管手術(shù)、 滯留針股靜脈取血 動物實(shí)驗時，采血量不宜超過動物總血量的十分之一。 第二節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 分析方法驗證 效能指標(biāo)的選擇 精密度 準(zhǔn)確度 檢測限 定量限 專屬性 線性 范圍 耐用性 鑒別試驗： ? ? 雜質(zhì)含量測定： ? ? ? ? ? ? ? 溶出度和藥物釋放度： ? ? ? ? ? ? 生物樣品含量測定： ? ? ? ? ? ? ? ? 雜質(zhì)限度檢查： ? ? ? 原料藥主要成分含量測定： ? ? ? ? ? ? 制劑中主要成分含量測定： ? ? ? ? ? ? 非定量分析 定量分析 微定量分析 ? ?一、常用樣品的種類、采集和貯藏 ?二、生物樣品分析前處理技術(shù) ?三、定量分析方法驗證 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 一、生物樣品的種類、采集、制備和貯藏 （一）種類： 生 物 樣 品 器官、組織 體液 血液、尿液、唾液、 乳汁、 精液、腦脊液、淚液、 膽汁、 胃液、胰液、淋巴液、 糞便 等 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 （二）生物樣品的采集和制備 血液（ blood） ——血漿、血清和全血 第三節(jié) 生物樣品分析 方法的基本要求 ——體現(xiàn)藥物濃度和治療作用之間的關(guān)系。 “回收試驗法 ” 和 “ 加樣回收試驗法 ” 第二節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 分析方法驗證 定義： 指測定條件稍有變動時，結(jié)果不受 影響的承受程度。 第二節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 分析方法驗證 例：定坤丸中人參皂苷 Re和人參皂苷 Rb1測定 Tab. 41 Recovery of ginsenoside Rb1 in Dingkun capsule Original /mg Added /mg Detected /mg Recovery /% Mean Recovery/ % RSD /% 數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用 9次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品，每一濃度測定三次。按低、中、高濃度分別精密加入人參皂苷Rb1對照品溶液，每一濃度 3份，按 “ 供試品溶液制備 ” 項下方法制成供試品溶液，按上述色譜條件測定。 第二節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 分析方法驗證 （ 2）加樣回收試驗 已準(zhǔn)確測定藥物含量 P的真實(shí)樣品 +已知量 A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為 M。 測定法： 用百分回收率（ R）表示，測定回 收率的具體方法可采用 “ 回收試驗法 ” 和 “ 加樣回收試驗法 ” 第二節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 分析方法驗證 （ 1）回收試驗法 空白 B+已知量 A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為 M。mL1濃度范圍內(nèi)， Y與 X之間具有良好線性關(guān)系。以對照品濃度 X(?g依次精密量取對照品儲備液 、 、 、 、 mL分別置 10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成人參皂苷 Rb1系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。 測定法： 設(shè)計具有一定梯度的 5~8個濃度點(diǎn)， 用作圖法或計算回歸方程建立 . Y=ax+b