限制性內(nèi)切酶ppt課件-文庫吧資料
2025-01-11 20:31本頁面
【正文】 G↓AATTCNN NNCTTAA↑GNN 2．限制酶產(chǎn)生平末端（ Blunt end） 在回文對稱軸上同時(shí)切割 DNA 的兩條鏈，則產(chǎn)生平末端，如 HaeⅢ（ GG↓CC）， SmaⅠ （ CCC↓GGG）， EcoRV（ GAT↓ATC）。 突出粘性末端，如 EcoRⅠ ；若在 3’ 側(cè)切割，則產(chǎn)生 339。 BcgⅠ ↓10（ N） CGA（ N） 6TGC（ N） 12↓； ↑12（ N） CGA（ N） 6ACG（ N） 10↑ TspRⅠ NNCAC（ G） TGNN↓ ↑NNGTG（ C） ACNN 1．限制酶產(chǎn)生匹配粘端（ Matched end） 識別位點(diǎn)為回文對稱結(jié)構(gòu)的序列經(jīng)限制酶切割后，產(chǎn)生的末端為匹配粘端，亦即粘性末端（ cohesive end），這樣形成的兩個(gè)末端是相同的，也是互補(bǔ)的。切點(diǎn)在兩端的有 Sau3AⅠ （ ↓GATC）、NlaⅢ （ CATG↓）和 EcoRⅡ （ ↓CCWGG） 等；在兩側(cè)的有 BcgⅠ [（ 10/12） CGA（ N） 6TGC（ 12/10） ]和 TspRⅠ（ CASTGNN↓）， BcgⅠ 酶的切割特性與其它酶不同，它們在識別位點(diǎn)的兩端各切開一個(gè)斷點(diǎn)，而不是只產(chǎn)生一個(gè)斷點(diǎn)。如 AlwNⅠ 和 DdeⅠ ，它們的識別序列如下： AlwNⅠ CAGNNNC↓TG； DdeⅠ C↓TNAG GT↑CNNNGAC GANT↑C 3．限制酶切割的位置 限制酶對 DNA 的切割位置大多數(shù)在內(nèi)部，但也有在外部的。 HindⅡ 識別的序列是 GTY↓RAC 。識別序列后面括號內(nèi)的數(shù)字表示在兩條鏈上的切割位置。 R=A 或 G Y=C 或 T M=A 或 C K=G 或 T S=C 或 G W=A 或 T H=A 或 C 或 T B=C 或 G 或 T V=A 或 C 或 G D=A 或 G 或 T N=A 或 C 或 G 或 T 2．限制酶識別序列的結(jié)構(gòu) 限制酶識別的序列大多數(shù)為回文對稱結(jié)構(gòu)，切割位點(diǎn)在 DNA 兩條鏈相對稱的位置。以下是幾個(gè)有代表性的種類，箭頭指切割位置。 表 21：各種限制與修飾系統(tǒng)的比較 Ⅱ Ⅰ Ⅲ 酶分子 內(nèi)切酶與甲基化酶分子不在一起 三亞基雙功能酶 二亞基雙功能酶 識別位點(diǎn) 46bp, 大多數(shù)為回文對稱結(jié)構(gòu) 二分非對稱 57bp 非對稱 切割位點(diǎn) 在識別位點(diǎn)中或靠近識別位點(diǎn) 無特異性，至少在識別位點(diǎn)外 1000bp 在識別位點(diǎn)下游 2426bp 限制反應(yīng)與甲基化反應(yīng) 分開的反應(yīng) 互斥 同時(shí)競爭 限制作用是否需用 ATP No Yes Yes 限制酶識別的序列 1．限制酶識別序列的長度 限制酶識別序列的長度一般為 48 個(gè)堿基，最常見的為 6 個(gè)堿基（表 22）。它們的識別位點(diǎn)分別是 AGACC 和 CAGCAG ，切割位點(diǎn)則在下游 2426bp 處。它在識別順序旁邊幾個(gè)核苷酸對的固定位置上切割雙鏈。 C（ N） 6GTGC 但是 EcoB 酶和 EcoK 酶的切割位點(diǎn)在識別位點(diǎn) 1000bp 以外，且無特異性。 TGA*（ N） 8TGCT EcoK 酶的識別位點(diǎn)如下，其中
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