限制性內(nèi)切酶ppt課件(已修改)
2025-01-17 20:31 本頁面
【正文】 限制性核酸內(nèi)切酶 制作人：郜原 日 期： 2022331 簡(jiǎn)介 限制性核酸內(nèi)切酶(restriction endonuclease):識(shí)別并切割特異的雙鏈 DNA序列的一種內(nèi)切核酸酶。 [別名 ] Endodeoxyribonuclease [酶反應(yīng) ] 限制性內(nèi)切酶能分裂 DNA分子在一限定數(shù)目的專一部位上。它能識(shí)別外源 DNA并將其降解。 [單位定義 ] 在指明 pH與 37℃ ，在 ，1小時(shí)消化 1μg的 λDNA的酶量為 1單位。 定義和命名 DNA限制性內(nèi)切酶： 生物體內(nèi)能識(shí)別并切割特異的雙鏈 DNA序列的一種內(nèi)切核酸酶。它可以將外來的 DNA切斷的酶，即能夠限制異源 DNA的侵入并使之失去活力，但對(duì)自己的 DNA卻無損害作用，這樣可以保護(hù)細(xì)胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進(jìn)行的，故名限制性內(nèi)切酶 (簡(jiǎn)稱限制酶 )。 限制性核酸內(nèi)切酶的命名；一般是以微生物屬名的第一個(gè)字母和種名的前兩個(gè)字母組成，第四個(gè)字母表示菌株 (品系 )。例如，從 Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內(nèi)切酶稱為 Bam H，在同一品系細(xì)菌中得到的識(shí)別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶，可以編成不同的號(hào)，如 HindII、HindIII， HpaI、 HpaII， MboI、 MboI等。 特征和種類 1．限制與修飾現(xiàn)象 早在 50 年代初，有許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)了限制與修飾現(xiàn)象，當(dāng)時(shí)稱作寄主控制的專一性（ host controlled specificity）。 l 噬菌體表現(xiàn)的現(xiàn)象便具有代表性和普遍性，其在不同宿主中的轉(zhuǎn)染頻率可說明這一問題（表 21）。 l 在感染某一宿主后，再去感染其它宿主時(shí)會(huì)受到限制。 菌株 λ噬菌體感染率 lK lB lC K 1 104 104 B 104 1 104 C 1 1 1 說明 K 和 B 菌株中存在一種限制系統(tǒng)，可排除外來的 DNA 。 104 的存活率是由宿主修飾系統(tǒng)作用的結(jié)果，此時(shí)限制系統(tǒng)還未起作用。而在 C 菌株不能限制來自 K 和 B 菌株的 DNA 。限制作用實(shí)際就是限制酶降解外源 DNA ，維護(hù)宿主遺傳穩(wěn)定的保護(hù)機(jī)制。甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤 A 成為 N6 甲基 腺膘呤，胞嘧啶 C 成為 539。 甲基胞嘧啶。通過甲基化作用達(dá)到識(shí)別自身遺傳物質(zhì)和外來遺傳物質(zhì)的目的。 根據(jù)酶的亞單位組成、識(shí)別序列的種類和是否需要輔助因子，限制與修飾系統(tǒng)主要分成三大類。表 21 是各種限制與修飾系統(tǒng)的比較。 Ⅱ 型（ type Ⅱ ）限制與修飾系統(tǒng)所占的比例最大，達(dá) 93% 。 Ⅱ型酶相對(duì)來說最簡(jiǎn)單，它們識(shí)別回文對(duì)稱序列，在回文序列內(nèi)部或附近切割 DNA ，產(chǎn)生帶 339。 羥基和 539。 磷酸基團(tuán)的 DNA 產(chǎn)物，需 Mg2+ 的存在才能發(fā)揮活性，相應(yīng)的修飾酶只需 SAM 。識(shí)別序列主要為 46bp ，或更長且呈二重對(duì)稱的特殊序列，但有少數(shù)酶識(shí)別更長的序列或簡(jiǎn)并序列，切割位置因酶而異，有些是隔開的。 Ⅱ s 型（ type Ⅱ s）限制與修飾系統(tǒng)，占 5% ，與 Ⅱ 型具有相似的輔因子要求，但識(shí)別位點(diǎn)是非對(duì)稱，也是非間斷的，長度為 47bp ，切割位點(diǎn)可能在識(shí)別位點(diǎn)一側(cè)的 20bp 范圍內(nèi)。 Ⅱ 型限制酶一般是
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