蛋白質(zhì)綜合實(shí)驗(yàn)ppt課件-文庫吧資料
2024-12-01 20:14本頁面
【正文】 關(guān)。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 實(shí)驗(yàn)原理 以聚丙烯酰胺作為支持介質(zhì)的一種電泳技術(shù)。 ? Spandex G(10200) （ 1） 數(shù)大，交聯(lián)度小，網(wǎng)孔大 （ 2）代表持水量， G25， 1g干膠持水 . 操作： ? 裝柱 ? 加樣 ? 洗脫 ? 清洗 ? 凝膠回收 做思考題 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 一、描述實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象 二、分析實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE） 分離血清蛋白 1．了解凝膠電泳的基本原理及其主要影響因素。凝膠顆粒有時(shí)還有非特異吸附現(xiàn)象。 ?對于分子量相差不多的物質(zhì)難以達(dá)到很好的分離。 ?分辨率不高，分離操作較慢。利用這種凝膠分子篩對大小，形狀不同的分子進(jìn)行層析分離，稱凝膠層析 。 2．學(xué)習(xí)葡聚糖凝膠層析的基本操作技術(shù)。如果待測樣品濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍，應(yīng)將樣品稀釋再測。一條理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該是斜率接近 l，且通過原點(diǎn)的直線，其范圍應(yīng)在被測物濃度的一半到二倍之間。 酚試劑 (mL) 搖勻， 30min后以 0號試管為空白對照，在 650nm處比色 . 作圖 以 OD650為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制一條過原點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。其不足之處是此反應(yīng)受多種因素干擾。在一定條件下，藍(lán)色強(qiáng)度與蛋白質(zhì)的量成正比例。 較快速 40分鐘內(nèi)； 干擾物質(zhì)：螯合劑；略高濃度的還原劑 說明：抗干擾能力強(qiáng)， 蛋白不可逆的變性 蛋白質(zhì)含量的測定 （ Lowry法） 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? Folin酚法（ Lowry法）測定蛋白質(zhì)濃度的操作技術(shù) ? 原理 蛋白質(zhì)含有兩個(gè)以上的肽鍵 (— CO— NH— )，因此有雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中，能與 Cu2+形成 紫紅色 絡(luò)合物。該水溶性的復(fù)合物在 562nm處顯示強(qiáng)烈的吸光性。 紫外吸收法 ? 較為靈敏； ? 快速； 5～ 10分鐘； 原理：蛋白質(zhì)中的酪氨酸和色氨酸殘基在 280nm處的光吸收 . 干擾物質(zhì)：各種嘌吟和嘧啶；各種核苷酸 說明：用于層析柱流出液的檢測；不消耗樣品，測定后樣品仍能回收利用 . BCA（ 2,2聯(lián)喹啉 4,4二甲酸二鈉）法
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1