實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)含量測(cè)定-文庫(kù)吧資料
2025-05-21 01:09本頁(yè)面
【正文】 0 1 2 3 4 5 6 7 標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液（ ml） 0 0 雙蒸水（ ml） 0 0 蛋白質(zhì)含量(mg/ml) 0 5 5 未知蛋白溶液（ ml） A280 操作步驟 紫外吸收法 生物化學(xué)與分子生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn) 考馬斯亮藍(lán)染色法（ Bradford法） 原理： 該方法由 Bradford 于1976年建立 。 ? 敏感度低，要求樣品的濃度較高，量較大。 ? 適合測(cè)試純度較高、成分相對(duì)單一的蛋白質(zhì)。許多化學(xué)物質(zhì)特別是含 C＝ C雙鍵和 C＝ O雙鍵的物質(zhì)在此波長(zhǎng)范圍有吸收，所以必須嚴(yán)格控制反應(yīng)條件。優(yōu)點(diǎn)： 靈敏， 較穩(wěn)定。 生物化學(xué)與分子生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn) 肽鍵在 190nm有強(qiáng)吸收峰。 圖 A中插圖是 1mg/ml的牛免疫球蛋白IgG(I)、 牛血清白蛋白 (B)和白明膠 (G)的吸收光譜 ， 緩沖液為： % Brij35, K2SO4,5mM KH2PO4,pH7。蛋白質(zhì)的吸收強(qiáng)度與上述幾種氨基酸的含量有關(guān)，因此 相同濃度的不同種類蛋白質(zhì)，其 280nm的吸收值差別很大 (圖 1)。 生物化學(xué)與分子生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn) 蛋白質(zhì)在紫外光區(qū)（ 190nm360nm） 有兩個(gè)強(qiáng)烈吸收峰： 280nm和 190nm。 ③ 樣品中含有哪些可能影響定量的 化學(xué)物質(zhì) ； ④ 所選方法是否簡(jiǎn)單 、 可靠； ⑤ 含量測(cè)定的專一性要求是否很高 。生物化學(xué)與分子生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)一 幾種 蛋白質(zhì)定量測(cè)定方法的比較 生物化學(xué)與分子生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn) 1 掌握紫外吸收法、 Folin－ 酚試劑法（ Lowry法）和考馬斯亮藍(lán)染色法（ Bradford法）測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和方法 2 掌握分光光度計(jì)的原理和使用方法 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1