蛋白組學(xué)翻譯后修飾-文庫吧資料
2025-05-21 06:23本頁面
【正文】 一步分析糖基化肽段的氨基酸序列，從而發(fā)現(xiàn)糖基化位點 核糖核酸酶 B中糖基化位點的分析 糖苷鍵酶 F作用前 糖苷鍵酶 F作用后 剩一個 GlcNAc 氨基酸序列的測定 m/z= TSAASSSNYCNQM RQHMDSSTSAASSSNYCNQMMKSRNLTKDRCKPVNTFVHE 糖基化類型的分析 ? 糖蛋白進(jìn)行蛋白酶切，得到含糖肽段，對肽段直接進(jìn)行 ESIMS/MS，以及 MALDITOFMS的 PSD，可以直接得到單糖碎片，從而確定糖鏈結(jié)構(gòu)。 ? 將磷酸化肽打碎，產(chǎn)生全部碎片離子，根據(jù)離子數(shù)量推斷肽序列和磷酸化位點。磷酸化肽段丟失 HPO3或者 H3PO4，產(chǎn)生質(zhì)量數(shù)減少80kD或者 98kD的子離子。 IMAC 填料－交聯(lián)劑－金屬螯合劑－金屬離子 MS MS/MS 磷酸基團(tuán)親和取代 ? 將磷酸肽上的磷酸基團(tuán)用另一種配基取代，再用親和純化的方法分離富集磷酸肽 ? 生物素取代 生物素取代 以 ?干酪素做測試 磷酸肽的識別 ? MALDI－ TOF－ MS結(jié)合磷酸酶水解法 ? 磷酸酯酶處理蛋白質(zhì)的前后，磷酸化肽段的質(zhì)量數(shù)會有變化，比較前后圖譜，尋找質(zhì)量數(shù)變化 80或 98Da和強(qiáng)度增大的信號就很可能是磷酸化肽段。 ? 利用了磷酸基團(tuán)的負(fù)電性，與 IMAC柱上的帶正電的金屬離子結(jié)合，從而起到純化的作用。 蛋白質(zhì)組學(xué)如何在翻譯后化學(xué)修飾中發(fā)揮作用？ ? 磷酸化 ? 糖基化 蛋白質(zhì)磷酸化 ? 磷酸化是通過蛋白質(zhì)激酶將 ATP 的磷酸基轉(zhuǎn)移到蛋白的特定位點上的過程 . ? 至少有 30%的蛋白被磷酸化修飾 ? 大部分蛋白磷酸化是可逆
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