酶蛋白的化學修飾ppt課件-文庫吧資料
2025-01-11 20:19本頁面
【正文】 碘乙酸、碘乙酰胺、丹磺酰氯、亞硝酸 Asp、 Glu 羧基 水溶性碳化二亞胺 Arg 胍基 苯乙二醛， 1,2－環(huán)己二酮、丁二酮 Cys 巰基 碘乙酸、碘乙酰胺、 N乙基馬來酰亞胺 二硫鍵 巰基乙醇、 DTT His 咪唑基 焦碳酸二乙酯、碘乙酸 Tyr 酚羥基 碘、四硝基甲烷 Trp 吲哚基 N溴代琥珀酰亞胺 各種氨基酸側鏈的修飾劑 有機大分子對酶的化學修飾是利用一些活性分子把特定的有機大分子結合到酶上，以改變酶的生理、生化性質(zhì)，實現(xiàn)特定目的的技術。 常用的二硫鍵交換試劑： DTNB， 5, 5’dithiobis(2Nitrobenzoate) 二硫二吡啶， 4, 4’ dithiodipyridine （ 或 2, 2’ dithiodipyridine） 二硫鍵交換產(chǎn)生的單體在一定波長下有很大光吸收，可用分光光度法定量連續(xù)監(jiān)測。巰基修飾劑可分為以下四類：二硫鍵交換，烷基化，?；?，重金屬化合物。 例如： 碘代乙酸 對蛋白質(zhì)進行修飾時 ,試劑可與半胱氨酸、甲硫氨酸、組氨酸 的側鏈及 α氨基、 ε氨基發(fā)生作用。 ②選擇不同的反應 pH 蛋白質(zhì)分子中各功能基的解離常數(shù)(pKa)是不同的。但 DFP在同樣條件下卻不能與 胰凝乳蛋白酶原 及一些簡單的 模擬化合物 作用 。 ① 利用蛋白質(zhì)分子中某些基團的 特殊性 。 3. 反應的專一性 專一性非常重要 。反應的溫度 、 pH都要小心控制 。 ② 有利于 專一性 修飾蛋白質(zhì) 。 ③ 標記的殘基在肽中穩(wěn)定 ,很易通過降解分離出來 ,進行鑒定 : ④ 反應的程度能用簡單的技術測定 。 特別注意： 修飾酶活性部位的氨基酸殘基的試劑應具備以下特征 : ① 選擇性地與一個氨基酸殘基反應 。 ⑤ 是否需要分離修飾后的 衍生物 。 ③ 在反應條件下 ,修飾反應 有沒有限度 。 選擇蛋白質(zhì)修飾劑要考慮的問題 : ① 修飾反應要完成到 什么程度 。 ② 僅修飾 α氨基 。 試劑的選擇 實驗目的不同 ,對專一性的要求也不同 ,因此 ,選擇試劑在很大程度上要依據(jù)修飾目的 。 對 側鏈基團 進行化學修飾是改造酶的性質(zhì)和功能的重要手段。 N端及 C端：氨基和羧基有參加催化功能的可能 。 超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase, SOD)、 尿酸酶等用 PEG修飾后，完全消除了酶的抗原性和免疫原性，減慢了它們在動物血液循環(huán)中被清除的速度，酶的活力可以保存 15％－ 45％。 例如： 用乙醛酸修飾胰凝乳蛋白酶的表面氨基，
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