蛋白組學(xué)翻譯后修飾-wenkub.com
2025-05-09 06:23 本頁(yè)面
【正文】 ? 磷酸化位點(diǎn)產(chǎn)生丟失 80kD或者 98kD的子離子。 ? 絲氨酸和蘇氨酸磷酸化肽段的質(zhì)量變化可能是 80Da，也可能是 98Da；酪氨酸磷酸化肽段只有 80Da的質(zhì)量數(shù)變化 PSD－ MALDI－ TOF－ MS ? PSD：源后衰變（ postsource decay），母離子在飛行中發(fā)生斷裂，丟失一個(gè)中性分子。 磷酸化蛋白質(zhì)的檢測(cè) ? 32P放射性同位素法 ? 抗體免疫印跡法 32P放射性同位素法 autoradiography ? ?32PATP滲入培養(yǎng) ? 蛋白樣品的制備 ? 雙向電泳 ? 檢測(cè) ? 考染或者銀染 ? 放射自顯影 ? 差異點(diǎn)分析 ? 檢測(cè) 放射性同位素法 ? 優(yōu)點(diǎn) ? 靈敏 ? 直觀 ? 局限 ? 同位素污染，操作不方便 ? 若磷酸化轉(zhuǎn)換速率低，則難以檢測(cè) ? 不能區(qū)分不同殘基的磷酸化 抗體免疫印跡法 ? 蛋白樣品的制備 ? 雙向電泳 ? 檢測(cè) ? 考染或者銀染 ? 免疫印跡（磷酸化特異抗體） ? 差異點(diǎn)分析 ? 檢測(cè) 抗體免疫印跡法 ? 優(yōu)點(diǎn) ? 靈敏 ? 直觀 ? 克服同位素法的局限 ? 無(wú)同位素污染，操作相對(duì)方便 ? 可檢測(cè)無(wú)磷酸化轉(zhuǎn)換的蛋白 ? 能區(qū)分不同殘基的磷酸化 磷酸化肽段的分離和富集 ? 使用磷酸化蛋白的抗體 ? IMAC法 ? 磷酸基團(tuán)親和取代 磷酸化蛋白的抗體 ? 目前已經(jīng)開(kāi)發(fā)出針對(duì)特異磷酸化位點(diǎn)的單克隆抗體， ?pTyr， ?pSer， ?pThr ? 利用這些單克隆抗體進(jìn)行親和純化，可以分離和富集特定磷酸化的
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