掌握層析chromatography的概念-文庫吧資料
2025-05-20 10:53本頁面
【正文】 量求出 .Vi可由 g ? Ｋｄ可通過實(shí)驗(yàn)求得 。 ? 凝膠干體積 （ Ｖｇ ） Ｖ Ｔ ＝Ｖ ０ +Ｖ ｉ ＋Ｖ ｇ 洗脫體積與Ｖｏ及Ｖｉ之間的關(guān)系 Ｖｅ＝Ｖｏ＋ＫｄＶｉ Ｋｄ＝ （ Ｖｅ－Ｖｏ ） ／Ｖｉ ? Ｋｄ 為樣品組分的分配系數(shù) ， 也可以說 Ｋｄ是 分子量不同的溶質(zhì)在凝膠內(nèi)部和外部的分配系數(shù) 。 ? 外水體積 （ V0） … 即存在于柱床內(nèi)凝膠外 ? 面空隙之間的水相體積 ， ? 相應(yīng)于一般層析法中流 ? 動(dòng)相的體積 。 ? VT = 1/4 ?D2h ? D是內(nèi)壁的直徑 ? h是凝膠層析柱床的高度 。 小分子 由于擴(kuò)散作用進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部而 被滯留 ,大分子 被排阻在凝膠顆粒外面 ,在顆粒之間 迅速通過 。 二 .基本原理 流動(dòng)相（洗脫液） 固定相（凝膠） 原理 ：被分離物質(zhì)中各組分的 分子量不同 。 其又稱為凝膠過濾或 分子篩過濾 或排阻層析 。 理論板數(shù) (n)：在層析柱上 ， 溶劑連續(xù)不斷加入 ， 化合物在流動(dòng)相和固定相中不斷分配平衡 ， 所發(fā)生的平衡次數(shù)稱為理論板數(shù) 。 反之 ,K值相差較小 ,不易 把混合物中的生物物質(zhì) 分離 。 從一個(gè)混合物中分離和純化一種生物物質(zhì)的純度如何 ， 取決于混合物中各組分 K 值的差異程度 。在離子交換層析中 K為交換常數(shù) . 分配系數(shù) K值大 ,說明物質(zhì)在層析中被固定相吸附得比較牢固 ,隨流動(dòng)相遷移的速度較慢 ,留在固定相中的時(shí)間較長 ,在洗脫液中后出峰。 在不同的層析機(jī)制中 ,分配系數(shù) K的含義不同 ,在吸附層析中 ,K為吸附平衡常數(shù) 。 分配系數(shù) 是一種物質(zhì)在兩種特定相中分配 ，在 特定的溫度時(shí) 這個(gè)系數(shù)的值是一個(gè) 常數(shù) ， 即 : 溶質(zhì)在固定相中的濃度 Cs K= ———————————— = —— 溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度 Cm 有效分配系數(shù) ：定義為化合物在一個(gè)相的總量除以另一個(gè)相中的總量。 ?.薄層層析 （ thin layper chromatography） 將適當(dāng)?shù)?吸附劑 在玻璃板或 其他材料薄板上 鋪成薄層 ， 樣品 點(diǎn)在上面隨后用流動(dòng)相展開達(dá) 到分離鑒定的方法 。 ?.柱層析 （ colum chromatography） 將 固 定 相 裝 在 層 析 柱 中 ， 使樣品 朝著一個(gè)方向移動(dòng) ， 通過各組分隨流動(dòng)相流動(dòng)而得到分離的方法 。 ?.凝膠層析 （ gel chromatography） 利用不同組分之間 分子大小不同 ， 在通過凝膠介質(zhì)時(shí)所受到的阻滯作用的差異而進(jìn)行分離的方法 。 ?.分配層析 (partition chromatography ) 利用不同組分在流動(dòng)相和固定相中的 分配系數(shù) 不同而進(jìn)行分離的方法 。 其 固定相 也可有兩種狀態(tài) ，
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1