dna分子標記的種類-文庫吧資料
2025-05-18 12:50本頁面
【正文】 d microsateUites)通常又稱為SSR，也可稱為 SSRP(Simple Sequence Repeat Polymorphisrms） 。 （ STS） 特定序列位點 (sequence— tagged site，縮寫 STS)是對由其特定引物序列所界定的一類標記的統(tǒng)稱。顯然，在采用 SSR技術分析微衛(wèi)星 DNA多態(tài)性時必須知道重復序列兩端的DNA序列的信息。 SSR標記 的基本原理：根據(jù)微衛(wèi)星序列兩端互補序列設計引物，通過 PCR反應擴增微衛(wèi)星片段，由于核心序列串聯(lián)重復數(shù)目不同，因而能夠用 PCR的方法擴增出不同長度的 PCR產物，將擴增產物進行凝膠電泳，根據(jù)分離片段的大小決定基因型并計算等位基因頻率。 SSR（ Simple sequence Repeats,簡單重復序列） SSR 分子標記由 Lit t M ,等于 1989 年創(chuàng)建的。 DNA擴增指紋印跡 (DNA Amplification Fingerprinting， DAF) DAF是一種改進的 RAPD分析技術，與 RAPD技術不同的是， DAF分析中所使用的引物濃度更高，長度更短（一般為 5一 8 bp），因此它所提供的譜帶信息比 RAPD大得多，如當使用 5個核苷酸的引物時，引物和模板的組合大約可擴增出 10一 100個DNA片段。 APPCR的缺點是每個新的多態(tài)性都必須經純化才能進一步使用。只要設計的引物在低嚴謹退火條件下能減少引物產生人為產物，應用成對組合的引物可以產生新的 AP— PC R譜帶， 但引物配對組合使用時，得到的圖譜與單引物單獨使用時產生的圖譜之和很不相同，這樣，50個引物能產生 1250種不同指紋圖譜。然后進行高嚴謹退火條件的循環(huán)，兩個位點間那些序列在低嚴謹度退火條件下發(fā)生的引物延伸可繼續(xù)在高嚴謹條件下擴增。這類標記又被稱為ISSR、 ASSR或 AMPPCR。 在 SSR的 5 ‘端或 3’ 端加上 2～ 4個隨機選擇的核苷酸，這可引起特點位點退火。在 DAF技術的基礎上，又展出ASAP技術。 基因定位：例如定位了萵苣霜霉病抗性基因。不需要DNA探針，用一個引物可擴增多個片段，技術簡單，只需少量的 DNA樣本，成本較低， RAPD標記一般是顯性遺傳（極少數(shù)是共顯性），但是 RAPD分析中重復性不高，由于共遷移的存在，在不同個體中出現(xiàn)相同分子量的滯后，并不能保證這些個體擁有同一條 (同源）的片段 實驗步驟 PCR→ 電泳 → 分析 應用 RAPD可用于對整個基因組 DNA進行多態(tài)性檢測 ，也可用于構建基因組指紋圖譜 。在 RFLP技術中成為分子標記的重復序列包括 ： (1)小衛(wèi)星(minisatellite)序列：重復單位 (motif)約有堿基 l0～ 60個(也有 16～ 100個堿基一說 )，在基因組中多次出現(xiàn)。 流程圖 酶切 →→ 電泳→→ 標記探針雜交 →→分析 一般選擇單拷貝探針 如果 RFLP探針是來自拷貝數(shù)可變串聯(lián)重復 (Varible number of tandem repeats，縮 VNTR)．則產生另一類因相同或相近序列的拷貝數(shù)變化所起的多態(tài)性。 RFLP技術的原理是檢測 DNA 在限制性內切酶酶切后形成的特定 DNA片段的大小。 理想分子標記的界定 (1)具有高的多態(tài)性 (2)共顯性遺傳，即利用分子標記可鑒別二倍體中雜臺和純臺基因型 (3)能明確辨別等位基因； (4)遍布整個基因組； (5)除特殊位點的標記外，要求分子標記均勻分布于整個基因組； (6)選擇中性 (即無基因多效性 )； (7)檢測手段簡單、快速 (如實驗程序易自動化 )； (8)開發(fā)成本和使用成本盡量低廉； (9)在實驗室內和實驗空間重復性好 (便于數(shù)據(jù)交換 )。DNA分子標記的種類以及進展 分子標記的定義 ? 廣義的分子標記 (molecular marker)是指可遺傳的并可檢測的 DNA序列或蛋白質。 ? 狹義的分子標記概念只是指 DNA標記，而這個界定現(xiàn)在被廣泛采納。 但
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