dna分子標(biāo)記的種類(已改無錯字)
2023-06-22 12:50:23 本頁面
【正文】 R的基礎(chǔ)上設(shè)計的，例如可能的序列是 (TA)10或 (CGA)6。擴(kuò)增的是 SSR之間的 DNA序列。又稱為 MP—PCR(microsatellite— primed PCR)。分析其多態(tài)性。另外，還有一種與 SPAR技術(shù)非常相似的標(biāo)記技術(shù)，即 ISTR (Inverse Sequence— tagged Repeat）技術(shù)，ISTR所用的引物是在反向重復(fù)序列基礎(chǔ)上設(shè)計的，PCR擴(kuò)增的是反向重復(fù)序列之間的 DNA序列。 DNA單鏈構(gòu)象多態(tài)性 (Single Strand Conformation Polymorphism，SSCP) SSCP是指等長的單鏈 DNA因核昔酸序列的差異而產(chǎn)生構(gòu)象變異，在非變性聚丙烯酞胺中的表現(xiàn)為電泳遷移率的差別。單鏈 DNA構(gòu)象分析對DNA序列的改變非常敏感，常常一個堿基差別都能顯示出來。在 SSCP分析中，利用 PCR技術(shù)定點(diǎn)擴(kuò)增基因組 DNA中某一目的片段，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行變性處理，雙鏈 DNA分開成單鏈，再用非變性聚丙烯酞胺凝膠電泳分離，根據(jù)條帶位置變化來判斷目的片段中是否存在突變。 SSCP結(jié)果判定是通過多個樣品之間對比，觀察條帶之間位置改變，從而顯示出不同生物個體的 DNA特異性， 達(dá)到指紋分析目的。為了進(jìn)一步提高 SSCP的檢出率，可將 SSCP分析與其它突變檢測方法相結(jié)合。其中與雜交雙鏈分析（ Heterocluplex analysis， Het）法結(jié)合可以大大提高檢出率。 Het法是用探針與要檢測的單鏈 DNA或 RNA進(jìn)行雜交，含有一對堿基對錯配的雜交鏈可以和完全互補(bǔ)的雜交鏈在非變性 PAG凝膠上通過電泳被分離開。對同一靶序列分別進(jìn)行SSCP和 Het分析可以使點(diǎn)突變的檢出率接 100%，而且實(shí)驗簡便。 應(yīng)用 SSCP是基因突變檢測的常用方法 ，廣泛用于各類群體點(diǎn)突變的檢測 ,包括人類遺傳病基因突變的探測、癌基因或抑癌基因的突變探測等。在動物中 ,該技術(shù)也已應(yīng)用于小鼠、牛、豬等的多種基因的檢測。 ? SSCP可用于預(yù)篩選克隆文庫。 ? 采用 SSCP分析技術(shù)對人體內(nèi)病毒作整體性的研究。 ? 3 、臨床疾病基因突變分析檢測 — 脊髓性肌萎縮癥基因缺失 ? 分析檢測細(xì)菌耐藥性 — 結(jié)核分枝桿菌 BFP藥物敏感性。 (Dideoxy Fingerprints， ddF) ddF是將雙脫氧末端終止測序法與 SSCP結(jié)合起來的分析技術(shù)，對由雙脫氧末端終止的長短不一的單鏈 DNA進(jìn)行 SSCP分析。如果目的片段存在一個突變，則所有大于某一大小對應(yīng)于突主變位置的雙脫氧終止片段無野生型系統(tǒng)，對于每一個突有多次機(jī)會檢測其遷移率改變，提高了檢測突變的效率。 ddF方法克服了 SSCP分析時因 DNA長度影響 SSCP顯示的困難，通過一種雙脫氧核昔酸生產(chǎn)特異性的單鏈 DNA，使其中長度合適的 DNA片段顯示 SSCP改變。 (AFLP) AFLP：特點(diǎn)是把 RFI 和 PCR結(jié)合了起來。其基本步驟是：把 DNA進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切，然后選擇特定的片段進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增 (在所有的限制性片段兩端加上帶有特定序列的“接頭”，用與接頭互補(bǔ)的但 3 ‘端有幾個隨機(jī)選擇的核苷酸的引物進(jìn)行特異 PCR擴(kuò)增，只有那些與 3 ’端嚴(yán)格配對的片段才能得到擴(kuò)增 )，再在有高分辨力的測序膠上分開這些擴(kuò)增產(chǎn)物，用放射性法、熒光法或銀染染色法均可檢測之。這種技術(shù)又稱為“選擇性限制性片段擴(kuò)增。 應(yīng)用 AFLP廣泛用于構(gòu)建遺傳連鎖圖譜、基因組研究、遺傳育種、親子鑒定、遺傳病診斷等領(lǐng)域。 AFLP 產(chǎn)生的多態(tài)性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過 RFLP 和RAPD 等技術(shù)，因而被認(rèn)為是指紋圖譜技術(shù)中多態(tài)性最豐富的一項技術(shù)。但該技術(shù)已申請專利， 在生產(chǎn)及商業(yè)上的應(yīng)用受到一定的限制。 CAPS (Cleaved amplified polymorphic sequence) CAPS技術(shù)又可稱為 PCR RFLP。所用的 PCR引物是針對特定的位點(diǎn)而設(shè)計的。其基本步驟是：先進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，然后將 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶酶切，再用瓊脂
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