dna分子標記的種類-展示頁
2025-05-22 12:50本頁面
【正文】 是，目前發(fā)現(xiàn)的任何一種分子標記均不能滿 足以上所有要求 DNA分子標記分類 一、第一代分子標記技術(shù) 以 southern雜交為核心的分子標記技術(shù)： RELP標記等 二、第二代分子標記技術(shù) 基于 PCR的 DNA分子標記： RAPD標記、 ISSR標記、 SSR標記、 STS標記等 基于 PCR與限制性酶切技術(shù)結(jié)合的 DNA標記： AFLP標記、CAPS標記等 三、第三代分子標記技術(shù) 基于單核苷酸多態(tài)性的 DNA分子標記 :SNP標記 四、其他幾種新型分子標記 一、第一代分子標記技術(shù) 限制性片段長度多態(tài)性 (restriction fragment length polymorphism，縮寫 RFLP)是發(fā)展最早的分子標記技術(shù)。因此凡是可以引起酶切位點變異的突變?nèi)琰c突變 (新產(chǎn)生和去除酶切位點 )和一段 DNA的重新組織 (如插人和缺失造成酶切位點問的長度發(fā)生變化 )等均可導致RFLP的產(chǎn)生。凡是引起復(fù)單位的大小和序列不同、基因組中重復(fù)的數(shù)目和分布不同等均可導致這種多態(tài)性的產(chǎn)生。 (2)微衛(wèi)星 (microsatelite) 或簡單重復(fù)序列 (simple sepuencerepeats，縮寫 SSR)：重復(fù)單位含有 1～ 5堿基 (也有 2～ 8個堿基一說 ) 二、第二代分子標記技術(shù) 基于 PCR的 DNA分子標記 ① 隨機引物 PCR標記： RAPD標記、 ISSR標、APPCR、 DAF等 ② 特異引物 PCR標記 :SSR標記、 STS標記、SCAR、 SPAR、 SSCAP、 ddF等 基于 PCR與限制性酶切技術(shù)結(jié)合的 DNA標記 ① 限制性酶切片段的選擇性擴增來顯示片段的多態(tài)性： AFLP標記等 ② 對 PCR擴增片段的限制性酶切來揭示擴增區(qū)段的多態(tài)性： CAPS標記等 DNA(RAPD) 該技術(shù)用一個 (有時用兩個 )隨機引物 (一般 8～ 10個堿基 )非定點地擴增 DNA片段，然后用凝膠電泳分開擴增片段。 品種鑒定 、 系譜分析：用于識別種群 、 家族 、 種內(nèi)或種間的遺傳變異 ， 為生物血緣關(guān)系或分類提供依據(jù) ， 還可以分析混合基因組樣品等 。 RAPD技術(shù)的發(fā)展和相近的分子標記種類 ? DAF(DNA amplification fingerprinting）：與 RAPD技術(shù)不同的是，在 DAF分析中，引物濃度更高，引物長度更短（一般 5~8個堿基）只有兩個溫度循環(huán)，并且往往用聚丙烯酰胺凝膠電泳，DAF通常會產(chǎn)生非常復(fù)雜的帶型。 ? AP— PCR(arbitrarily primed po[ymerase chain reaclion) ：在 AP— PCR分析中，擴增分為三個部分，每個部分要求的條件和組分的濃度存在差異；在第一個 PCR循環(huán)中，引物濃度較高；引物長度不定，并且常常來自為其它目的而設(shè)計的引物 ? MAAP(Multiple Arbitrary Pu‘nplicon Profiling)： 這是Caetano— Anolle（ 1994）創(chuàng)造的一個詞，想用來統(tǒng)稱所有這些相關(guān)技術(shù)，但迄今為止這個詞很少使用 (Anchored mi— cmsatellite oligonucleotides） Zietkiewicz et a1． (1994)對 STMS技術(shù)進行了發(fā)展，他們用加錨微衛(wèi)星寡核苷酸作引物，對基因組節(jié)段而不是重復(fù)序列本身進行擴增。這樣就能導致位于反向排列的間隔不太大的重復(fù)序列間的基因組節(jié)段進行 PCR擴增。 PCR (Arbitrarily Primed Polymerase Chain Reaction， AP—PCR） 在 AP— PCR分析中，所使用的引物較長（ 10－ 50 bp) ， PCR反應(yīng)分為兩個階段，首先寡核苷酸引物在低嚴謹條件下與模板 DNA退火，此時發(fā)生了一些合成，以便穩(wěn)定模板與引物之間相互作用。采用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析 PCR產(chǎn)物，最終反應(yīng)結(jié)果與RAPD類似。
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