dna分子標記的種類(參考版)
2025-05-14 12:50本頁面
【正文】 。此標記具有操作簡單、重復性好、穩(wěn)定性好、效率高的特點。G 、 C含量在 40~50% 引物的設計原則： SRAP的技術流程 大小 ： 17~18bp 上游引物：在 5’端前 10個是填充序列，接著是 CCGG， 3’端是 3個選擇堿基。 RAPD技術源于 PCR技術，但又不同于 PCR技術，差別主要體現(xiàn)在隨機擴增引物上。盡管基因間整個序列的同源性不足于用 RFL P 雜交檢測 ,但抗病基因中存在的這些保守區(qū)域為在其它植物中進行 PCR 擴增和分離 RGAs 提供了機會。該技術高效、特異，在一次反應中可以檢測 45個核苷酸序列拷貝數(shù)的改變，目前已經(jīng)應用于多個領域、多種疾病的研究。 ? 隨著計算機和 DNA芯片技術引入分子生物學領域，研究者可同時對成千上萬個克隆測序，用計算機分析數(shù)據(jù)和顯示最終結果。 三、第三代分子標記技術：單核苷酸多態(tài)性 (SNP)技術 ? 單核苷酸多態(tài)性是指基因組 DNA序列中由于單個核苷酸（ A， G， C， T）的突變引起多態(tài)性，它是一種單核苷酸的變異。在酶切前進行 RCR產(chǎn)物檢測，其多態(tài)性稱為 ALP。其基本步驟是：先進行 PCR擴增，然后將 PCR擴增產(chǎn)物用限制性內切酶酶切，再用瓊脂糖凝膠電泳將 DNA片段分開，用 EB染色，觀察。 CAPS (Cleaved amplified polymorphic sequence) CAPS技術又可稱為 PCR RFLP。 AFLP 產(chǎn)生的多態(tài)性遠遠超過 RFLP 和RAPD 等技術，因而被認為是指紋圖譜技術中多態(tài)性最豐富的一項技術。這種技術又稱為“選擇性限制性片段擴增。 (AFLP) AFLP：特點是把 RFI 和 PCR結合了起來。如果目的片段存在一個突變，則所有大于某一大小對應于突主變位置的雙脫氧終止片段無野生型系統(tǒng)，對于每一個突有多次機會檢測其遷移率改變，提高了檢測突變的效率。 ? 3 、臨床疾病基因突變分析檢測 — 脊髓性肌萎縮癥基因缺失 ? 分析檢測細菌耐藥性 — 結核分枝桿菌 BFP藥物敏感性。 ? SSCP可用于預篩選克隆文庫。 應用 SSCP是基因突變檢測的常用方法 ，廣泛用于各類群體點突變的檢測 ,包括人類遺傳病基因突變的探測、癌基因或抑癌基因的突變探測等。 Het法是用探針與要檢測的單鏈 DNA或 RNA進行雜交，含有一對堿基對錯配的雜交鏈可以和完全互補的雜交鏈在非變性 PAG凝膠上通過電泳被分離開。為了進一步提高 SSCP的檢出率，可將 SSCP分析與其它突變檢測方法相結合。在 SSCP分析中，利用 PCR技術定點擴增基因組 DNA中某一目的片段，將擴增產(chǎn)物進行變性處理，雙鏈 DNA分開成單鏈，再用非變性聚丙烯酞胺凝膠電泳分離，根據(jù)條帶位置變化來判斷目的片段中是否存在突變。 DNA單鏈構象多態(tài)性 (Single Strand Conformation Polymorphism，SSCP) SSCP是指等長的單鏈 DNA因核昔酸序列的差異而產(chǎn)生構象變異，在非變性聚丙烯酞胺中的表現(xiàn)為電泳遷移率的差別。分析其多態(tài)性。擴增的是 SSR之間的 DNA序列。SCAR標記方便、快捷、可靠，可以快速檢測大量個體，結果穩(wěn)定性好，重現(xiàn)性高。這樣的位點就稱為 SCAR。 序列特異性擴增區(qū) (Sequence—characterized amplified regions SCAR) SCAR 標記是在 RAPD技術的基礎上發(fā)展起來的。 IFLP (intron fragmemt length polymorphism) ? 檢測的對象是內含子的長度差異。 DAMD (directed amplification of minisatellite region DNA) 直接用小衛(wèi)星的核心序列作引物進行擴增。由于重復的長度變化極大，所以這是檢測多態(tài)性的一種有效方法。 STMS ? STMS(Sequence tagge
醫(yī)療健康相關推薦
鄂ICP備17016276號-1