dna分子標(biāo)記的種類-wenkub.com
2025-05-06 12:50 本頁面
【正文】 目前已經(jīng)成功應(yīng)用于許多植物的遺傳圖譜構(gòu)建、重要性狀基因標(biāo)記、種質(zhì)資源的多樣性研究及分子標(biāo)記輔助育種等方面。它們不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)或其他耳機結(jié)構(gòu) 首先，隨機擴增引物是單個加入，而不是成對 (正、反向引物 )加入，其次，隨機引物短，一般 RAPD技術(shù)采用的引物含 10個堿基，由于隨機引物較短，與常 PCR相比， RAPD退火溫度較低，一般為 35— 45℃ 。 標(biāo)記 ( Resistance Gene Analogs ,抗病基因類似物 ) RGAs 是用基于抗病基因保守序列設(shè)計的引物擴增基因組得到的抗病基因類似序列的新型的分子標(biāo)記。 ? SNP是基因組中最簡單、最常見的多態(tài)性形式，具有很高的遺傳穩(wěn)定性。與 RFLP 技術(shù)一樣，CAPS技術(shù)檢測的多態(tài)性其實是酶切片段大小的差異。但該技術(shù)已申請專利， 在生產(chǎn)及商業(yè)上的應(yīng)用受到一定的限制。其基本步驟是：把 DNA進行限制性內(nèi)切酶酶切，然后選擇特定的片段進行 PCR 擴增 (在所有的限制性片段兩端加上帶有特定序列的“接頭”，用與接頭互補的但 3 ‘端有幾個隨機選擇的核苷酸的引物進行特異 PCR擴增，只有那些與 3 ’端嚴(yán)格配對的片段才能得到擴增 )，再在有高分辨力的測序膠上分開這些擴增產(chǎn)物，用放射性法、熒光法或銀染染色法均可檢測之。 (Dideoxy Fingerprints， ddF) ddF是將雙脫氧末端終止測序法與 SSCP結(jié)合起來的分析技術(shù)，對由雙脫氧末端終止的長短不一的單鏈 DNA進行 SSCP分析。在動物中 ,該技術(shù)也已應(yīng)用于小鼠、牛、豬等的多種基因的檢測。其中與雜交雙鏈分析（ Heterocluplex analysis， Het）法結(jié)合可以大大提高檢出率。單鏈 DNA構(gòu)象分析對DNA序列的改變非常敏感，常常一個堿基差別都能顯示出來。又稱為 MP—PCR(microsatellite— primed PCR)。SCAR比 RAPD和其它利用隨機引物的方法在基因定位和作圖中的應(yīng)用更好，因為它有更高的可重復(fù)性 (原因是使用的引物長 )，標(biāo)記是共顯性遺傳的。 RAMPO (random amplified microsatellite polymorphism ) RAMPO的基本步驟是：先用一個單一的隨機引物 (即 RAPD引物 )對基因組 DNA擴增，用電泳將擴增片段分開，然后，把凝膠轉(zhuǎn)移到尼龍膜上，使之與一個帶有放射性標(biāo)記 (或其它標(biāo)記 )的與 SSR互補的寡核苷酸探針 (如 [CA]8和 [GA]8 )雜交，放射自顯影后可得到新的多態(tài)性類。其特點包括：一般檢測到的是一個單一的多等位基因位點；共顯性遺傳，故可鑒別雜合子和純合子；得到的結(jié)果復(fù)性很高 STMS的發(fā)展和相近的分子標(biāo)記種類 ? (1)把與 SSR互補的寡核苷酸作為多位點 RFLP技術(shù)中的探針； ? (2)把與 SSR互樸的寡核苷酸作為 PCR引物 (可單獨作引物或與隨機引物配合使用 )，擴增的是基因組 DNA 的特定片段，即 MP— PCR和 RAMPs： ? (3)用標(biāo)記的 SSR探針與 RAPD擴增片段雜交．即RAMPO或稱為 RAHM 或 RAMS； ? (4)用 5 ‘或 3 ‘端加錨的 SSR 作引物 (如 GG[CA] )，即ISSR。利用特異 PCR技術(shù)的最大優(yōu)點是它產(chǎn)生的信息非常可靠，而不象 RAPD、AFLP和利用隨機探針產(chǎn)生的 RFLP存在某種模糊性 (如難以鑒別片段的來源 ) 這類分子標(biāo)記主要包括以下幾種分子標(biāo)記。 SSR具有以下一些優(yōu)點：（ l）一般檢測到的是一個單一的多等位基因位點；⑵微衛(wèi)星呈共顯性遺傳，故可鑒別雜合子和純合子；⑶所需 DNA量少。 PCR擴增產(chǎn)物是在凝膠上進行分離，通過銀染即可產(chǎn)生非常復(fù)雜帶型。 AP— PCR方法不需預(yù)知序列資料，而且檢測的基因組樣本是任意的，還能夠用于檢測近等基因系（或同類系）中的多態(tài)性。 PCR (Arbitrarily Primed Polymerase Chain Reaction， AP—PCR） 在 AP— PCR分
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1