【正文】 itle: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO NOT COPY 根據(jù)分析方法是采用非儀器分析還是儀器分析，可用幾 種方法確定 最低 定量 檢測限（ LOQ）。 3） 如果檢測限度是由直觀評價或信噪比得來，則需要提供相關(guān)的色譜圖；如果檢測限度是由計 算或外推法得來的估計值，則應(yīng)專門對一些已知接近或等于限度的樣品進(jìn)行分析 。 響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率 檢測限度（ LOD） = σ：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn) 差（通過空白樣品測背景響應(yīng)值或 y軸 標(biāo)準(zhǔn)偏差估算 ） S：校正曲線的斜率（通過被測物的校正曲線求得） 所需數(shù)據(jù) 1） 確定 主藥成份和主要 雜質(zhì) /降解產(chǎn)物的檢測限，最低檢測限表示為被分析物在樣品中的濃度（例如百分比， ppb）。對比 已知濃度 被分析物的信號與空白樣品的信號，確 立分析物可被 準(zhǔn)確地 檢測到的濃度。檢測限可以通過 對一系列 含 已知濃度被分析物 的樣品 進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn)確測得被分析物的 最小濃度來確定。除了下面的方法，其它方法也是可以接受的。 含量項下含量濃度的樣品溶液的主峰應(yīng)該是純的 （ 光譜純 ， 僅適用于 HPLC） ；有關(guān)物質(zhì)項下 樣品溶液 各 已知雜質(zhì)峰 應(yīng)該是純的 （ 光譜純 ， 僅適用于 HPLC）。 b. 已知雜質(zhì)對主峰無干擾，相鄰兩峰之間可以明顯分離，如無特殊規(guī)定，一般分離度應(yīng)不小于 ，或者 p/v≥10。從長期穩(wěn)定性試驗中得到的原化合物和雜質(zhì)、降解產(chǎn)物的穩(wěn)定的數(shù)據(jù)也能證明和支持專屬性。這些可能有助于開發(fā)和驗證合適的分析方法，但如果在加速和長期穩(wěn)定性試驗中沒有特定降解產(chǎn)物產(chǎn)生，這些信息對檢測特定產(chǎn)物并不總是必 要的。 4） 此外，也可以進(jìn)行加速和長期穩(wěn)定性試驗。穩(wěn)定性指示的測定方法應(yīng)能準(zhǔn)確地測定活性成分，而不被降解產(chǎn)物、工藝過程中雜質(zhì)、輔料或其它潛在雜質(zhì)所干擾。 3） 強制降解得到的 雜質(zhì)峰可以用來評估穩(wěn)定性指示能力。降解前和降解后空白、樣品的色譜圖。 如果在上述條件下 未觀察到明顯變化 ，說明此物質(zhì)穩(wěn)定，如果物質(zhì)變化太多的話，應(yīng)該重新調(diào)節(jié)實驗條件，降解范圍控制在 5~15%內(nèi)，采用稀釋后的各種降解樣品或控制樣品考察主峰的純度。 ：對于 API，在酸、堿條件下， 可 加強 反應(yīng) 至 24 小時 。hr/m2 酸 1N HCl中 60℃ 放置 2h 堿 1N NaOH 中 60℃ 放置 2h 編號 No.： SOP 標(biāo)準(zhǔn) 操作 程序 STANDARD OPERATION PROCEDURE 名稱：分析方法驗證管 理程序 頁碼 Page: Page 11 of 21 Title: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO NOT COPY 氧化 ※ 10%雙氧水中常溫放置 20min *：可用同時具有強白光和紫外光強制降解條件的儀器 下 放置的樣品 ， 代替 分別 在強白光強制降解條件的儀器下放置 和紫外光強制降解條件的儀器下放置的樣品。 一般的強制降解條件如下表 （ 每類降解條件均需要一個控制樣品進(jìn)行核對 ） ，如有必要，可在方案中設(shè)置具體條件 ： 類型 條件 高溫 60℃ 下放置 7 天 高濕 25℃ ,90%RH，放置 7 天 強白光 * 總照度不低于 106Lux強制降解指將樣品置于相關(guān)的苛刻條件下進(jìn)行降解：光、高溫、高濕、酸 /堿水解和氧化。 當(dāng)雜質(zhì) 或降解產(chǎn)物沒被鑒別或不能得到時，專屬性 可以通過 將 含有 一定量的 雜質(zhì) 或 降解產(chǎn)物的樣品測定 結(jié)果，與另一種成熟的方法 測定結(jié)果進(jìn)行比較 ，如藥典方法或經(jīng)論證的其他方法（與該方法不相關(guān)的方法）進(jìn)行比較來證實。可以進(jìn)行峰純度試驗的分析技術(shù)包括： DAD(光電二極管陣列 )檢測器、 PDA（圖像光電二極管陣列）檢測器和 MS（質(zhì)譜）檢測器。其他的分析方法也同樣要有代表性的證明。 含量測定和雜質(zhì)測定的專屬性 實驗方法 對色 譜法來說， 要充分考慮兩個最相近組分的分離度，并用有代表性的色譜圖來證明專屬性。 編號 No.： SOP 標(biāo)準(zhǔn) 操作 程序 STANDARD OPERATION PROCEDURE 名稱：分析方法驗證管 理程序 頁碼 Page: Page 10 of 21 Title: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO NOT COPY 鑒別試驗的專屬性 鑒別試驗應(yīng)該能區(qū)分有可能存在的結(jié)構(gòu)相似或結(jié)構(gòu)密切相關(guān)的化合物。如果使用一個非專屬的分析方法，應(yīng)該用其它輔助的分析方法保證完全的專屬性。 專屬性 在鑒別試驗、 雜質(zhì)檢查和含量測定的驗證期間，應(yīng)該進(jìn)行專屬性的研究。 溶出度分析 ： 與控制溶液樣品比較，過濾樣品溶液的含量值應(yīng)在 98%102%之間，并由此決定初濾液應(yīng)該棄去的體積。 實驗 方法 過濾膜研究應(yīng)選取方法中指定的過濾膜進(jìn)行，不去 除 初濾液并連續(xù)收集一定體積的濾液，與控制樣品（未過濾的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和離心的樣品溶液）相比較。 在預(yù)定的穩(wěn)定性期間內(nèi)，被測試的樣品溶液應(yīng)在下述幾方面與 0 天相似 ： a. RRT 可辨認(rèn)各已知雜質(zhì)； b. 含量在最小檢測量 （報告限） 以上的各雜質(zhì)峰數(shù)一致，且增長量不得大于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的 20%； c. 雜質(zhì)之和的絕對偏差不得超過質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的 50%。 編號 No.： SOP 標(biāo)準(zhǔn) 操作 程序 STANDARD OPERATION PROCEDURE 名稱：分析方法驗證管 理程序 頁碼 Page: Page 9 of 21 Title: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO NOT COPY 接受標(biāo)準(zhǔn) 含量和溶出度分析 ： 在預(yù)定的穩(wěn)定性期間內(nèi)，被測試的對照品或樣品溶液的含量與初始溶液相比 應(yīng) 在 %~%范圍內(nèi)。 實驗 方法 對照品或樣品溶液的穩(wěn)定性經(jīng)常用新配制的對照品溶液來檢驗，根據(jù)試驗方法在特定試驗條件下在規(guī)定時間點定量測定對照品或樣品溶液中的被分析物。 溶液穩(wěn)定性 溶液穩(wěn)定性 試驗 應(yīng)根據(jù)試驗方法而 設(shè)計 ，因為很多試驗是利用自動取樣器整夜運行，并且在試驗完成之前樣品在實驗室環(huán)境下已放置多個小時。除另有規(guī)定外，驗證方案也應(yīng)根據(jù)本規(guī)定起草。 驗證報告一旦批準(zhǔn)，根據(jù) 報告中的建議，方法最終被確定下來，然后發(fā) 布和使用。 驗證數(shù)據(jù)的管理 為了跟蹤所有的驗證活動，最好分配一個相應(yīng)的文件夾來說明產(chǎn)生數(shù)據(jù)的類型和位置，所有的驗證數(shù)據(jù)，包括紙質(zhì)版和電子版數(shù)據(jù)應(yīng)該被正確并完整的記錄、文件化、引用。任何沒有經(jīng)過 編號 No.： SOP 標(biāo)準(zhǔn) 操作 程序 STANDARD OPERATION PROCEDURE 名稱：分析方法驗證管 理程序 頁碼 Page: Page 8 of 21 Title: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO NOT COPY 批準(zhǔn)的方案變更要被當(dāng)作偏差處理，并在驗證報告中說明。方法草案完成時， 初期的方法驗證，尤其是正被討論的或不是很了解的參數(shù)，如專屬性應(yīng)盡快確定。設(shè)計驗證實驗時盡量在一個實驗中包含多個驗證參數(shù)。 在開始驗證研究前，應(yīng)根據(jù)方法的目的和驗證要求寫出一個準(zhǔn)備充分的驗證方案。 實驗開始前 成功的方法驗證開始于方法的有效開發(fā)。 方法驗證的名稱和編號 方法驗證文件的名稱要正確描述所驗證的產(chǎn)品的全稱和內(nèi)容，驗證文件分方案和報告，方案和報告共用一個驗證編號，在編號的后面用（ P）表示方案和（ R）表示報告。方法分析和方法驗證的信息量隨著研究階段的不同而變化，如表 51 所示 。 QA 負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)審核和批準(zhǔn)驗證方案和報告。 4 職責(zé) RESPONSIBILITIES 分析方法部門負(fù)責(zé)起草驗證方案和報告 。 儀器的 LOQ 則用 S/N≈ 10確定，用 于評估 具體使用的 分析儀器的靈敏度。方法的 LOQ 指 能夠定量檢測到被分析物的最低濃度，并在該濃度點上具有合適的精密度、準(zhǔn)確度和靈敏度。 定量限 (LOQ)它被用于雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的微量檢測。它經(jīng)常被應(yīng)用于制劑中有關(guān)物質(zhì)微量水平的分析。 重現(xiàn)性 指考察不同實驗室分析時，對方法精密度及準(zhǔn)確度的影響。精密度可從以下三個層次考慮： 編號 No.： SOP 標(biāo)準(zhǔn) 操作 程序 STANDARD OPERATION PROCEDURE 名稱：分析方法驗證管 理程序 頁碼 Page: Page 6 of 21 Title: Analytical Method Validation Procedure 禁止 復(fù) 印 DO N