【正文】 用中小分子化合物對(duì)免疫反應(yīng)的干預(yù)作用。 11． 力爭(zhēng)篩選出多個(gè) RA 關(guān)聯(lián)基因和 CNP，闡明其致病機(jī)制。 8． 闡明調(diào)節(jié)性和致病性 T 細(xì)胞之間比例失衡在 RA 發(fā)病機(jī)制中的作用 25 9． 分析間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì) T 細(xì)胞調(diào)控作用機(jī)制。 6． 明確 Th17 及其相關(guān)調(diào)控因子如 Cyr61 和 Wnt/DKK 對(duì)于 RA 滑膜炎癥和引起 骨質(zhì)破壞的現(xiàn)象。 4． 成功鑒定 RAT 細(xì)胞膜表面葡聚糖基化修飾的膜翻轉(zhuǎn)異位抗原。 2． 系統(tǒng)分析其 TCR 特異性、表達(dá)水平以及 ZAP70 等信號(hào)途徑改變。 RANKL TNF 樣區(qū)表位的篩選。 18． 體外實(shí)驗(yàn)研究 OPGHSP 重組蛋白防治骨破壞和抑制炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制。 17． 利用 siRNA 檢測(cè)下調(diào) RA 相關(guān)炎癥新靶點(diǎn)對(duì) RA 細(xì)胞炎性反應(yīng)及自身抗原的免疫反應(yīng)的作用。 15． 檢測(cè)小分子化合物對(duì) CII 免疫后不同階段 CIA 小鼠中 Treg 亞群數(shù)量，格局和功能的改變。 13． 對(duì)上述研究中發(fā)現(xiàn)的 RA 關(guān)聯(lián)基因和 CNP 的作用機(jī)制進(jìn)行研究。 11． 檢測(cè) MSCs 治療 CIA 模型 IL10/Foxp3 Tg 小鼠血清細(xì)胞因子水平，并分離小鼠脾細(xì)胞，分析各 T 細(xì)胞亞群的數(shù)量、細(xì)胞表型及體外活化功能。 9． 利用從 IL10/Foxp3 Tg 小鼠獲得的不同亞群 Treg細(xì)胞，探討不同亞型 Treg對(duì) CIA 動(dòng)物模型的治療作用。 7． 采用小鼠軟骨細(xì)胞或成骨細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，研究阻斷 Cyr61 后對(duì)于成骨細(xì)胞生長(zhǎng)與維持的影響。 5． 鑒定具有葡聚糖基化修飾的 RAT細(xì)胞膜翻轉(zhuǎn)異位抗原。 3． 深入研究 RAT細(xì)胞免疫生物學(xué)特點(diǎn)。 第三年度 （一）研究?jī)?nèi)容 1． 檢測(cè) RA 自身抗原的修飾特點(diǎn)。 15． 闡明 IL17RC 可溶性多肽抑制骨破壞和炎癥反應(yīng)相關(guān)因子的生物學(xué)功能。 13． 獲得利用 RA 相關(guān)炎癥新靶點(diǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠建立的 CIA 模型，并了解其發(fā)病前后的各項(xiàng)免疫學(xué)指標(biāo)。 11． 總結(jié)首批測(cè)試結(jié)果，建立初步的 RA 和 HDAC 相關(guān)性假說(shuō)，并將該假說(shuō)反饋回 HDACi 分 子的設(shè)計(jì)和合成。 9． 確定豆蔻酸化變構(gòu)肽的免疫學(xué)功能。 7． 明確 RA 相關(guān) 小 分子在 RA 患者外周血各免疫細(xì)胞亞群中的功能。 5． 分析出不同亞群 Treg 對(duì)關(guān)節(jié)炎的預(yù)防作用。 3． 通過(guò)體內(nèi)試驗(yàn) 初步明確 γδT 細(xì)胞二個(gè)主要亞群在 RA 中的作用。 （二）預(yù)期目標(biāo) 1． 爭(zhēng)取獲得多個(gè) RA 自身抗原。 18． 在細(xì)胞水平上，研究 IL17RC 可溶性多肽抑制 RANKL 及炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生的生物學(xué)功能。 16． 對(duì)篩選出的 RA 相關(guān)炎癥新靶點(diǎn)的特異性 siRNA 進(jìn)行化學(xué)修飾 、 鑒定；同時(shí)用其轉(zhuǎn)基因小鼠建立 CIA 模型。 14． 對(duì)篩選出的變構(gòu)肽進(jìn)行豆蔻酸化修飾、鑒定。 12． 上調(diào)或下調(diào) RA 相關(guān)小 分子的表達(dá)，分析其對(duì)各種免疫細(xì)胞活化及分化功能的影響。 10． 研究特定亞群 Treg，對(duì) CIA 模型的關(guān)節(jié)炎形成、體內(nèi)自身抗體的產(chǎn)生及組織病理改變的作用。 8． 分析 FLS 中 Wnt/DKK 不同分子對(duì)于 FLS 增殖活化的信號(hào)調(diào)控途徑。 6． 用 Vγ1 或 Vγ4 特異性抗體對(duì)相應(yīng)的 T 細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)清除，觀察 Vγ1 或Vγ4T 細(xì)胞對(duì)關(guān)節(jié)炎的影響。 4． 糖表位特異性抗體和抗 T 細(xì)胞抗體作用于 RAT 細(xì)胞后導(dǎo)致其表型和功能變化的體外實(shí)驗(yàn)。 3． 研究早期 RA 患者的主要 T 淋巴細(xì)胞。 第二年度 （一）研究?jī)?nèi)容 1． 利用制備的特異性抗體， 篩選 RA 自身抗原。 11． 研究 OPGHSP 重組蛋白、 RANKL TNF 樣區(qū)多肽疫苗、 IL17RC 可溶性多肽 。 9． 完成 ClassI， ClassIIa， ClassIIb 和 ClassIV 的代表性 HDAC 同功酶的同源模建和結(jié)構(gòu)優(yōu)化工作。 7． 爭(zhēng)取篩選出新的 RA 關(guān)聯(lián)基因；精確定位多個(gè) RA 關(guān)聯(lián)基因。 5． 闡明 MSCs 對(duì) RA 患者 T 細(xì)胞 功能的影響。 3． 闡明 RA 關(guān)節(jié)滑液中炎癥細(xì)胞亞群及其炎癥因子在 RA 滑膜炎癥的早期作用及相互調(diào)控機(jī)制，篩選 RA 炎癥細(xì)胞抗凋亡的調(diào)控機(jī)制和新分子。 21 （二）預(yù)期目標(biāo) 1． 爭(zhēng)取 獲得多個(gè) RA 相關(guān)的新的候選抗原和表位。 19． 構(gòu)建原核表達(dá) RANKL TNF 樣區(qū)多肽疫苗、 IL17RC 可溶性多肽。 17． 設(shè)計(jì)、合成、篩選，針對(duì) RA 相關(guān)炎癥新靶 點(diǎn)的特異性 siRNA。 15． 測(cè)定篩選出的變構(gòu)肽對(duì) RA 自身反應(yīng)性 T 細(xì)胞活化的影響。 14． 對(duì)項(xiàng)目組前期發(fā)現(xiàn)的 RA 關(guān)聯(lián) SNP 進(jìn)行進(jìn)一步基因定位工作，并在大樣本中驗(yàn)證。 12． 從細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞因子分泌等方面，探討 MCSs 對(duì)淋巴細(xì)胞的分化的影響。 10． 分析 FLS 中 Wnt/DKK 不同分子對(duì)于 FLS 增殖活化的影響。 8． 分析 RA 局部炎癥與滑液中炎癥因子對(duì)于滑膜細(xì)胞的作用，以及 RA 滑膜細(xì)胞所分泌的炎癥因子對(duì)于 RA 中 Th1 和 Th17 細(xì)胞的抗凋亡作用。 6． T 細(xì)胞二個(gè)亞群（ Vγ1/Vγ4）產(chǎn)生 IFNγ 和 IL4 的分子機(jī)制研究。 4． 分析早期 RA 患者滑膜組織與外周血中自身反應(yīng)性 TCRV 亞家族的表達(dá)。 2． 合成 GlcNAc糖蛋白。 19 3）抗 Cyr61 人源化單克隆抗體的制備及對(duì) RA 骨破壞的抑制作用研究。 4. 新型生物制劑對(duì) RA 骨破壞的抑制作用研究 1） OPGHSP 重組蛋白對(duì) RA 骨損傷和滑膜炎癥的抑制作用研究。 3. RA 相關(guān)新型炎癥靶點(diǎn)及其干預(yù)策略研究 1） 針對(duì)靶分子的序列特異性 siRNA 的設(shè)計(jì)和篩選。 2. 新型免疫調(diào)節(jié)分子對(duì) RA 自身免疫調(diào)控及治療作用研究 1）娃 兒藤堿類似物的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制及對(duì) CIA 鼠關(guān)節(jié)炎的抑制作用研究。 2）變構(gòu)肽的體外篩選。 研究?jī)?nèi)容： 本課題將在項(xiàng)目組成員既往研究以及本項(xiàng)目前述研究基礎(chǔ)之上，針對(duì) RA 自身免疫反應(yīng)的啟動(dòng)、調(diào)控、炎癥反應(yīng)及骨破壞等四個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，探索 RA 干預(yù)的新策略，并通過(guò)與傳統(tǒng)緩解病變抗風(fēng)濕藥（ DMARDs）甲氨蝶呤比較，評(píng)價(jià)新型免疫治療策略的療效及安全性。 2） RA 特征性 SNP 的分布研究。一方面進(jìn)一步對(duì)已發(fā)現(xiàn)的新遺傳易感基因及其致病作用進(jìn)行系統(tǒng)研究，另一方面為臨床早期診斷尋找新的特異性靶標(biāo)，既有理論意義，又有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。除了易感基因可做為診斷靶標(biāo)外，本研究團(tuán)隊(duì)前期工作發(fā)現(xiàn)的一系列血清蛋白或抗原，甚至 miRNA 等均可做為新型診斷靶標(biāo)用于 RA 臨床。 經(jīng)費(fèi)比例： 20% 承擔(dān)單位： 北京大學(xué)、南開(kāi)大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 栗占國(guó) 學(xué)術(shù)骨干： 尹芝南、穆榮、洪章勇、何菁、葉華 課題 RA 易感基因及早期診斷靶標(biāo)研究 預(yù)期目標(biāo)： 鑒定 RA 新的易感基因、 miRNA 表達(dá)譜及新的血清蛋白標(biāo)志分子，尋找 RA新的生物靶標(biāo)用于臨 床早期診斷。 2）上述 RA 相關(guān)小分子調(diào)控免疫功能的機(jī)制研究。 2） MSCs 對(duì) CIA 小鼠的抑制作用研究。 2） RA 患者外周血 Treg 細(xì)胞的分布及致病作用研究。 研究?jī)?nèi)容： RA 自身免疫應(yīng)答過(guò)程除 了 MHC肽 TCR 誘導(dǎo)的 T 細(xì)胞活化反應(yīng)外，還受細(xì)胞因子、小分子及調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞等因素的負(fù)調(diào)控影響，本項(xiàng)目通過(guò)對(duì)調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞及小分子的免疫調(diào)控機(jī)制進(jìn)行系統(tǒng)深入的研究，為 RA 免疫干預(yù)策略提供新的靶向。 2） Wnt/DKK1 通路在 RA 滑膜細(xì)胞活化中的作用研究。 16 本課題的主要研究?jī)?nèi)容如下 1. RA 關(guān)節(jié)滑液中炎癥細(xì)胞亞群及其炎癥因子在 RA 滑膜炎癥啟動(dòng)時(shí)相的作用與調(diào)控機(jī)制。本課題將從分子、細(xì)胞及一系列基因敲除動(dòng)物模型水平，利用抗體阻斷、 RNA 干擾和基因轉(zhuǎn)染等不同方法，系統(tǒng)闡述 Th17 等免疫細(xì)胞調(diào)控滑膜炎癥和骨破壞的分子通路。 經(jīng)費(fèi)比例： 15% 承擔(dān)單位： 北京大學(xué)、中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 高曉明 學(xué)術(shù)骨干： 吳玉章、徐曉軍、牟芝蓉、呂平、孫曉麟、劉霞 課題 RA 相關(guān)炎癥及免疫損傷機(jī)制 預(yù)期目標(biāo)： 系統(tǒng)闡明 RA 滑膜炎癥和骨破壞的發(fā)生機(jī)制和調(diào)控通路，為進(jìn)一步發(fā)展臨床早期防治 RA 骨質(zhì)疏松和骨破壞的臨床新策略 提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 3) 分離純 化 Vγ1 和 Vγ4 γδ T 細(xì)胞，在體外擴(kuò)增培養(yǎng)，轉(zhuǎn)移至關(guān)節(jié)炎小鼠，觀察不同亞群 γδ T 細(xì)胞對(duì)關(guān)節(jié)炎的調(diào)節(jié)作用。 2. 固有免疫相關(guān) T 細(xì)胞亞群參與 RA 發(fā)病的分子機(jī)制研究 1) γδT 細(xì)胞二個(gè)主要亞群（ Vγ1/Vγ4）產(chǎn)生 IFNγ 和 IL4 的分子機(jī)制研究。 3） T細(xì)胞表面糖表位譜系對(duì)免疫應(yīng)答功能的影響。 本課題的主要研究?jī)?nèi)容如下： 15 1. 特異性自身反應(yīng)性 T細(xì)胞免疫應(yīng)答的分子機(jī)制研究 1） RA自身反應(yīng)性 T細(xì)胞 免疫生物學(xué)特性 分析。 經(jīng)費(fèi)比例： 15% 承擔(dān)單位： 中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所、中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 課題負(fù)責(zé)人： 陳唯軍 學(xué)術(shù)骨干： 楊光、牟峰、張明誠(chéng)、董潔、孫宏賀、 趙永岐 課題 RA 的自身免疫應(yīng)答機(jī)制研究 預(yù)期目標(biāo)： 通過(guò)系統(tǒng)研究 RA 患者自身抗原特異性 T 細(xì)胞表位和 T 細(xì)胞表面分子調(diào)控自身免疫應(yīng)答的方式，以及不同 T 細(xì) 胞亞群的調(diào)控機(jī)制，深入認(rèn)識(shí) RA 自身反應(yīng)性 T 細(xì)胞活化的致病機(jī)制，最終形成擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的免疫相關(guān)疾病診斷和治療的新產(chǎn)品，提供治療或者控制嚴(yán)重影響我國(guó)人民身體健康的自身免疫病的新策略。 2) 糖基化修飾對(duì)自身抗原誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的影響。 4）新型 RA 中 HLADR4/1 特異性 修飾 抗原的篩選及其抗原表位的鑒定。 2）修飾抗原在 HLADRB1 特異性 T 細(xì)胞激活中的作用。 14 4）新的自身抗原在 HLADR4 遺傳背景下誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究。 2） 抗原肽與 RA 易感 HLADRB1 分子的結(jié)合能力研究。從分子、細(xì)胞、動(dòng)物模型及患者外周血四個(gè)層面系統(tǒng)闡述上述新抗原的致病機(jī)制等。 2. 建立新抗原的化學(xué)和酶學(xué)修飾平臺(tái)，闡明翻譯后修飾在 RA 發(fā)病中的作用。課題一至五，共同為課題六提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，而課題六是在其他課題研究的基礎(chǔ)上，研究成果服務(wù)于 RA 治療的必要途徑，為課題一至五提供臨床落腳點(diǎn)。 課題一、二、三是針對(duì) RA 發(fā)病的自身免疫啟動(dòng)、異常免疫應(yīng)答、炎癥及組織破壞三個(gè)環(huán)節(jié)中 RA 免疫病理反應(yīng)發(fā)生發(fā)展的新機(jī)制的探討 ，對(duì) RA 抗原特異性自身免疫活化通路中關(guān)鍵性調(diào)控分子進(jìn)行了系統(tǒng)研究，課題四是對(duì)課題一至三闡述的 RA 自身應(yīng)答的負(fù)調(diào)控機(jī)制研究，包括新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞和小分子等抑制性細(xì)胞和分子。 本項(xiàng)目的六個(gè)課題均是圍繞 RA 發(fā)病機(jī)制中免疫異常、炎癥和組織破壞以及13 干預(yù)策略的關(guān)鍵問(wèn)題進(jìn)行設(shè)置，各課題既有明確的研究方向，又有課題間的密切聯(lián)系。在 RA 的基礎(chǔ)研究向臨床轉(zhuǎn)化、創(chuàng)新性理論等方面達(dá)到國(guó)際一流水平。從 RA 發(fā)病機(jī)制的主要環(huán)節(jié)，在RA 發(fā)生的遺傳背景、免疫機(jī)制以及臨床診斷和干預(yù)方法等多方面，展開(kāi)系統(tǒng)的研究工作。 4. 創(chuàng)新的研究方法和原創(chuàng)性結(jié)果： 本團(tuán)隊(duì)成員在糖組學(xué)、抗原表位組學(xué)等前沿學(xué)科均有原創(chuàng)性研究，在抗原糖基化修飾方面建立了新的糖蛋白合成方法，在抗原表位功能研究方面創(chuàng)立了一系列新的表位預(yù)測(cè)和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法，這些先進(jìn)方法與豐富的臨床資源相結(jié)合，保證了本項(xiàng)目應(yīng)用基礎(chǔ)研究的創(chuàng)新性研究成果。 12 2. 原創(chuàng)性研究基礎(chǔ)上的新層面的進(jìn)一步研究： 6 個(gè)課題均在團(tuán)隊(duì)大量前期研究基礎(chǔ)上進(jìn)行，是針對(duì)團(tuán)隊(duì)前期發(fā)現(xiàn)的 RA 新易感基因、新抗原和新型調(diào)控分子的作用及致病機(jī)制的系統(tǒng)研究，具有很強(qiáng)的原創(chuàng)性，能夠創(chuàng)造一系列具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型臨床診斷和免疫干預(yù)新方法，具有重大的理論和臨床應(yīng)用價(jià)值。 3）具備免疫干預(yù)方法評(píng)價(jià)的一系列特有的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。 4. 實(shí)驗(yàn)平臺(tái)： 1）所在實(shí)驗(yàn)室既有教育部創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)、教育部臨床免疫重點(diǎn)學(xué)科，又有衛(wèi)生部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、 211 重點(diǎn)學(xué)科，實(shí)驗(yàn)室裝備先進(jìn)，技術(shù)力量雄厚，保證了實(shí)驗(yàn)需要的所有技術(shù)平臺(tái)，實(shí)驗(yàn)技術(shù)在國(guó)內(nèi)處于領(lǐng)先水平。 3）結(jié)構(gòu)合理的優(yōu)秀科研團(tuán)隊(duì)保證了研究方案的順利實(shí)施：優(yōu)秀的中青年學(xué)術(shù)骨干，具備良好的大型科研課題實(shí)施的工作能力，掌握實(shí)驗(yàn)涉及的所有先進(jìn)技術(shù)，保證了項(xiàng)目的實(shí)施和技術(shù)問(wèn)題的解決。 2. 學(xué)術(shù)隊(duì)伍： 1）高水平的學(xué)術(shù)帶頭 人保證了項(xiàng)目研究方向的準(zhǔn)確性和研究方案的可行性。以上 6 個(gè)方面的技術(shù)路線如下： RA 相關(guān)新型自身抗原鑒定及修飾特點(diǎn)研究 隨機(jī)肽庫(kù) RA 模擬肽 信息學(xué) 分析 免疫共沉淀 天然抗原 RA 新抗原 糖芯片檢測(cè) 合成糖基化修飾蛋白 單抗免疫親和層析結(jié)合液質(zhì)聯(lián) 用鑒定新 修飾 抗原 已知修飾 抗原 表位分析 BIAOWIE HLADRB1 分子結(jié)合 能力