【正文】 79 洗板機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。 標(biāo)本采集、接收、保存操作程序。 輸血科 預(yù)防措施程序。 9. 臨床意義 TPAb 是 TP 感染后所產(chǎn)生的抗體 ,用以反應(yīng) TP 的感染情況 。 7． 控制品使用水平和頻率 質(zhì)控水平：衛(wèi)生部臨界值血清 , 每板一次 。 檢驗(yàn)完畢后，清理其桌面，血清樣本放入專用樣本貯存冰箱內(nèi)，質(zhì)控血清盤(pán)放入冰箱；填寫(xiě)操作記錄使用記錄本。單項(xiàng)陽(yáng)性樣本必須復(fù)查；“灰區(qū)”結(jié)果必須復(fù)查；罕見(jiàn)模式必須復(fù)查。 終止后在 10 分鐘內(nèi)完成判讀，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定。顯色時(shí)間從開(kāi)始加第一滴顯色液 B 開(kāi)始計(jì)時(shí)。 用洗板機(jī)洗滌 6 次，拍干。 樣本檢測(cè) 用微量加樣器取 50ul 相應(yīng)樣品及質(zhì)控品、陰陽(yáng)性對(duì)照品加入對(duì)應(yīng)各孔，空白對(duì)照不加。 樣本分離 將已編 號(hào)的樣本配平離心， 3000r/min 5min。 樣本編號(hào) 按順序?qū)⑸暾?qǐng)單和樣本一一對(duì)應(yīng)編號(hào)。 參考波長(zhǎng) 630nm。 5．標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控 質(zhì)控 參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心質(zhì)控。 試劑： 科華公司 TPAb 診斷試劑盒 (ELISA) 。C冰箱冷藏。C)條件下不超過(guò) 8小時(shí)。 保證樣品管的密閉狀態(tài)，離心分離血清 /漿備用。 3．樣本 血清或血漿 樣品類型為受見(jiàn)檢者血清或血漿。 77 項(xiàng)目名稱 XX大學(xué) XX醫(yī)院輸血科 文件編號(hào) ZNYXXXX/MYXM310 版次 /修改 第 2版 /第 0次修改 ELISA 梅毒螺旋體抗體 (TPAb)操作規(guī)程 編制 /時(shí)間 陳 明 / 審核 /時(shí)間 XXX/ 審批 /時(shí)間 XXX/ 1．目的 規(guī)范檢測(cè)“ TPAb”過(guò)程。 5． 滴加試劑前應(yīng)輕搖滴瓶，使之混勻，并棄去開(kāi)始 1～ 2 滴。 3． 陽(yáng)性樣本必須雙管復(fù)查，復(fù)查陽(yáng)性者送 HIV 確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。 9．注意事項(xiàng)： 1． 檢測(cè)過(guò)程必須符合 HIV 實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范和生物安全規(guī)定，嚴(yán)防交叉感染。 7．結(jié)果計(jì)算： 臨界值（ Cutoff）的計(jì)算： 臨界值（ Cutoff） =+陰性對(duì)照平均 OD 值 8．結(jié)果判斷： 1． 樣品的 OD 值≥ Cutoff 值者為 HCV 抗體反應(yīng)陽(yáng)性。 正常時(shí)，陰性對(duì)照 OD 值應(yīng)≤ ，陽(yáng)性對(duì)照 OD 值應(yīng)≥ ， 陰性對(duì)照值若小于 以 計(jì)算。 12． 用酶標(biāo)儀單波長(zhǎng) 450nm（ 用 空白對(duì)照 調(diào) 0）或雙波長(zhǎng) 450nm/630nm 測(cè)定各孔OD 值 ， 15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù) 。） 10． 每孔加入 1 滴底物緩沖和 1 滴底物液，充分混勻，置 37℃溫育 10 分鐘。（注：洗滌時(shí)個(gè)孔要加滿洗液，勿使孔間交叉污染。 8． 密封， 置 37℃水浴溫育 30 分鐘。采用洗板機(jī)時(shí)應(yīng)設(shè)定每遍有 30～ 60 秒的浸泡時(shí)間。 76 6． 將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液充分洗滌 6 遍，拍干。 4． 在樣品孔中加入 100ul（ 2 滴）待測(cè)樣品，陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔分別入 100ul（ 2滴）陰性或陽(yáng)性對(duì)照 品 ， 空白孔不加， 充分混勻。 2． 用去離子水或蒸餾水 20 倍稀釋濃縮洗滌液。濃縮洗滌液按 1/20 比例以蒸餾水稀釋備用。 4．設(shè)備試劑 檢測(cè)儀器： Biocell Int 酶標(biāo)儀， DEMIII 自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)。 如果 8小時(shí)內(nèi)不能完成檢測(cè)即應(yīng)將標(biāo)本放入 2到 8176。 儲(chǔ)存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫 (15到 30176。 用真空采樣管采集受檢者血液標(biāo)本 4～ 5ml。 用于獻(xiàn)血員 及高危人群中抗 HIV 抗體的篩查。 75 項(xiàng)目名稱 XX大學(xué) XX 醫(yī)院輸血科 文件編號(hào) ZNYXXXX/MYXM309 版次 /修改 第 2版 /第 0次修改 抗 HIV 抗體 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn) 操作規(guī)程 編制 /時(shí)間 陳 明 / 審核 /時(shí)間 XXX/ 審批 /時(shí)間 XXX/ 1．目的 規(guī)范 ELISA 法檢測(cè)“ 抗 HIV”的過(guò)程。 3． 滴加試劑前應(yīng)輕搖滴瓶，使之混勻，并棄去開(kāi)始 1～ 2 滴。 9．注意事項(xiàng)： 1． HCV 抗體測(cè)定結(jié)果必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。 7．結(jié)果計(jì)算： 臨界值（ Cutoff）的計(jì)算： 臨界值（ Cutoff） =+陰性對(duì)照平均 OD 值 8．結(jié)果判斷： 1． 樣品的 OD 值≥ Cutoff 值者為 HCV 抗體反應(yīng)陽(yáng)性。 2. 正常時(shí)，陰性對(duì)照 OD 值應(yīng)≤ ，陽(yáng)性對(duì)照 OD 值應(yīng)≥ ， 陰性對(duì)照值若小于 以 計(jì)算。 12． 用酶標(biāo)儀單波長(zhǎng) 450nm（需設(shè)空白對(duì)照）或雙波長(zhǎng) 450nm/630nm 測(cè)定各孔 OD值。） 10． 每孔加入 1 滴底物緩沖和 1 滴底物液，充分混勻，置 37℃溫育 10 分鐘。（注：洗滌時(shí)個(gè) 孔要加滿洗液，勿使孔間交叉污染。 8． 置 37℃水浴溫育 30 分鐘。采用洗板機(jī)時(shí)應(yīng)設(shè)定每遍有 30～ 60 秒的浸泡時(shí)間。 6． 將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液充分洗滌 6 遍，拍干。 4． 在樣品孔中加入 100ul（ 2 滴）樣品稀釋液及 10ul 待測(cè)樣品，空白孔加入 100ul樣品稀釋液，陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔分別入 100ul（ 2 滴）陰性或陽(yáng)性對(duì)照，充分混勻。 2． 用去離子水或蒸餾水 20 倍稀釋濃縮洗滌液。濃縮洗滌液按 1/20 比例以蒸餾水稀釋備用。 4．設(shè)備試劑 檢測(cè)儀器： Biocell Int 酶標(biāo)儀， DEMIII 自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)。 如果 8小時(shí)內(nèi)不能完成檢測(cè)即應(yīng)將標(biāo)本放入 2到 8176。 儲(chǔ)存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫 (15到 30176。 用真空采樣管采集受檢者血液標(biāo)本 4～ 5ml。 2．原理 微孔條已預(yù)包高純度的 HCV 抗原，檢測(cè)時(shí)若血樣中含有抗－ HCV 抗體，與之形成特異性結(jié)合物，再加入 HRP 標(biāo)記的鼠抗人 IgG 單抗，用 TMB 底物顯色，顯色深淺與抗－ HCV 抗體的含量成正比。 3. 盒保試劑保存于 28C，嚴(yán)禁冰凍。 4．結(jié)果判斷： （ 1） HbsAg、 HbsAb、 HbeAg 的陽(yáng)性結(jié)果顯示為“ 紅色 ” 陰性結(jié)果顯示“無(wú)色” 5．注意事項(xiàng) 1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中這好使用當(dāng)天患者新鮮血清標(biāo)本，才能保證佳效果，應(yīng)避免使用抗凝血漿。然后放置室溫處待用。 3．操作方法： 1． 抽取患者靜脈血 2ml 于試管中，將樣品試管放入離心機(jī)中離心分離出血清，代用。 2．原理 乙肝兩對(duì)半金標(biāo)快速診斷試劑為應(yīng)用先進(jìn)的免疫膠體金層析生物技術(shù)原理，用于檢測(cè)人血清中乙肝病毒。 保存條件：干燥、 4～ 30℃。 5． 本檢測(cè)過(guò)程接觸血液樣本，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。謹(jǐn)防受潮。避免在極干燥或過(guò)高溫度下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 71 6．注意事項(xiàng)： 1． 僅供體外診斷用。 無(wú)效結(jié)果：試紙條上未出現(xiàn)紫紅線。 5．結(jié)果判斷： 陽(yáng)性結(jié)果：試紙條在檢測(cè)線和對(duì)照線位置各出現(xiàn)一條紫紅線。 3． 用毛細(xì)管吸取 80ul 以上新鮮待檢標(biāo)本滴于試紙條箭頭指示加樣處。 試紙罐組成： 1． HbsAg 全血金標(biāo)法試紙條 25 條 4 罐 1 份 2．稀釋液 3ml/瓶 4 瓶 4 支 3．滅菌一次性采血針、毛細(xì)管 各 1 支 /包 /袋 4 8 張 4．操作步驟： 1． 將密封罐打開(kāi)，取出所需試紙條后，立即關(guān)好 密封罐。 3．用途與特色： 本試紙條用于末梢血（指血或耳血）或血清、血漿類標(biāo)本的 HbsAg 檢測(cè)，適用于血站篩選、臨床體檢和急救等檢測(cè)。當(dāng)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，濾膜只允許血清通過(guò)，阻止血細(xì)胞的滲透，樣本血清中 HbsAg 可與金標(biāo)單抗 — Hbs 結(jié)合形成復(fù)合物，由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動(dòng)。