小麥rubisco單克隆抗體的制備-powerpoint文檔(參考版)
2025-01-25 23:48本頁面
【正文】 f、 吸取上清，檢測抗體，陽性孔可繼續(xù)克隆化，或擴(kuò)大培養(yǎng)、凍存。d、 取雜交瘤細(xì)胞懸液 1ml， 加入 1% 瓊脂糖培養(yǎng)液 1ml混勻，鋪于上層。b、 臨用前將 % 瓊脂糖生理鹽水溶液與等量雙倍濃度的 HT培養(yǎng)基混勻，配成 1% 瓊脂糖培養(yǎng)液， 45℃ 水浴中溫育。?f、 取抗體檢測陽性孔的細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，并凍存。?d、 每種雜交瘤細(xì)胞分裝 96孔板一塊，每個(gè)稀釋度 32孔，每孔量為 ， 每孔的雜交瘤細(xì)胞數(shù)分別為 、 3和 10。?b、 制備待克隆的雜交瘤細(xì)胞懸液，用含20% 血清的 HT培養(yǎng)基稀釋至每毫升含 、15和 50個(gè)細(xì)胞 3中不同的稀釋度。雜交瘤細(xì)胞的克隆化雜交瘤細(xì)胞的克隆化 ?a、 制備小鼠腹腔細(xì)胞。 在 490nm波長下測定樣品的 OD值，結(jié)果以 P／N比值表示，即將樣品的 OD值與陰性樣品 OD值的均值相比，若大于，即判為陽性。結(jié)果判定 洗 滌 終 止 顯 色 洗 滌 加 二 抗 每孔加入稀釋至工作濃度的羊抗鼠IgG二抗 100μL，37℃ 孵育 2h。 每孔加入經(jīng)稀釋液稀釋的待測抗血清樣品 100μL， 同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照， 37℃ 孵育 2h。在篩選和鑒定單抗時(shí)常用抗原固相法，即用抗原包被聚乙烯微板，借以檢測樣品中的 McAb 包 被 洗 滌封 閉 洗 滌加一抗 用碳酸鹽 Buffer將兩酶抗原稀釋到所需濃度，每孔加入100μL， 4℃ 包被過夜?？梢?，該法具有靈敏、快速、容易操作和無需昂貴儀器等優(yōu)點(diǎn)，而且經(jīng)改用醛化紅細(xì)胞以后，克服原來重復(fù)性差的缺點(diǎn)。間接血凝試驗(yàn)又稱被動(dòng)血凝試驗(yàn)（ PHA）， 是目前應(yīng)用較廣的檢測方法之一。單抗與多抗的比較優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn)單抗針對(duì)單一抗原純度高專一性
電大資料相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1