小麥rubisco單克隆抗體的制備-powerpoint文檔-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 31大亞基小亞基Rubisco標(biāo)準(zhǔn)蛋白 分子量 （1000）我們得到高純度的 Rubisco后，就可以制備其單克隆抗體了，下面先跟大家介紹一下單克隆抗體制備的技術(shù)。v1971年發(fā)現(xiàn) RuBp羧化酶是一個(gè)雙功能酶，它還能催化 RuBp的氧化作用。? 大多數(shù) Rubisco小亞基由 123個(gè)氨基酸殘基組成，不同植物間小亞基氨基酸序列的同源性比大亞基低得多，一般在 70% 左右，然而，小亞基序列中有兩個(gè)區(qū)域非常保守，即殘基 10—21 和 61—67 ，暗示這些部分可能有什么重要功能。一般的抗原分子大多含有多個(gè)不同的抗原決定簇，所以常規(guī)抗體也是針對(duì)多個(gè)不同抗原決定簇抗體的混合物。在融合后的細(xì)胞群體里，盡管 未融合的正常脾細(xì)胞 和 相互融合的脾細(xì)胞 是HGPRT+， 但不能連續(xù)培養(yǎng)，只能在培養(yǎng)基中存活幾天，而 未融合的 HGPRT骨髓瘤細(xì)胞 和 相互融合的 HGPRT骨髓瘤細(xì)胞 不能在HAT培養(yǎng)基中存活，只有 骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞形成的雜交瘤細(xì)胞 因得到分別來(lái)自親本脾細(xì)胞的 HGPRT和親本骨髓瘤細(xì)胞的連續(xù)繼代特性，而在 HAT培養(yǎng)基中存活下來(lái)。由于它特異性高，靈敏度高，現(xiàn)已廣泛用于篩選和鑒定單抗。 單抗檢測(cè)單抗檢測(cè) （間接（間接 ELISA））用 PBST洗滌 3次，每次洗浸泡 5分鐘后拍干。?c、 按每毫升加入 51041105細(xì)胞的比例，在上述雜交瘤細(xì)胞懸液中分別加入腹腔巨噬細(xì)胞。e、 37℃ 、 % 濕潤(rùn)培養(yǎng) 714天；克隆生長(zhǎng)至2mm時(shí)，用毛細(xì)吸管吸出克隆，直接轉(zhuǎn)種于含有飼養(yǎng)細(xì)胞的 24孔板，擴(kuò)大培養(yǎng)。（ 1）有限稀釋法（ 2）軟瓊脂法a、 在培養(yǎng)皿中制備飼養(yǎng)細(xì)胞（小鼠腹腔細(xì)胞）單層。 用 2mol/L的硫酸溶液終止。 放射免疫測(cè)定是用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體，以檢測(cè)相應(yīng)抗原或抗體的定量方法。?
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