食品安全分析課件(參考版)
2025-01-17 19:42本頁面
【正文】 （三）熒光法 （ 1）原理 還原性抗壞血酸 脫氫抗壞血酸 熒光化合物 熒光強度與脫氫抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比。脎的量與總抗壞血酸含量成正比，將紅色脎溶于硫酸后進行比色，由標準曲線計算樣品中總 VC。這時如用草酸，低鐵離子可以還原 2， 6二氯靛酚，使測定數字增高，使用醋酸可以避免這種情況的發(fā)生； ? GB/T — 2023 《 蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸 含量測定方法》 第二法 ? 可測總抗壞血酸，總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸型。在提取過程中，可加入EDTA等螯合物。 試劑 ? 1%草酸溶液：稱取 10g草酸，加水至 1000mL； ? 2%草酸溶液：稱 20g草酸，加水至 1000mL； ? 維生素 C標準液：準確稱 20mgVC溶于 1%草酸中，并稀釋至100mL，吸 5mL于 50mL容量瓶中，加入 1%草酸至刻度，此溶液每毫升含有 ； ? % 2， 6二氯靛酚溶液：稱取 2， 6二氯靛酚 50mg，溶于200mL含有 52mg碳酸氫鈉的熱水中，冷卻后，稀釋至 250mL，過濾于棕色瓶中，貯存于冰箱內，應用過程中每星期標定一次。 ? 還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。常用的測定方法有： ?（ 1） 2， 6二氯靛酚法 （還原型 VC） ?（ 2） 2， 4二硝基苯肼法 （總 VC） ?（ 3）碘酸法 ?（ 4）碘量法 ?（ 5）熒光分光光度法 （一） 2， 6— 二氯靛酚滴定法 原理 ? 還原型抗壞血酸可以還原染料 2， 6二氯靛酚。進一步水解則生成 2， 3 二酮古樂糖酸，失去生理作用。維生素 C廣泛存在于植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、獼猴桃、柑桔等食品中含量尤豐富。 （ 5）測定 ? 于激發(fā)波長 440nm，發(fā)射波長 525nm，測量樣品管及標準管的熒光值。 （ 4）核黃素的吸附與洗脫 ? 核黃素吸附柱： ? 硅鎂吸附劑約 1g用濕法裝入柱，占柱長 1/22/3（約 5cm）為宜（吸附柱下端用一團脫脂棉墊上），勿使柱內產生氣泡，調節(jié)流速為 60滴 /min。滴加 3%雙氧水溶液數滴，直到高錳酸鉀顏色褪掉。各管加 ，混勻。 C冰箱中保存一周。過濾上述酶解液定容至 100mL,用干濾紙過濾。水解液冷卻后，滴加 1mol/L氫氧化鈉，取少許水解液，用 %溴甲酚綠檢驗呈草綠（ pH為 ） （ 2）酶解 : ? 含有淀粉的水解液：加入 3ml 10%淀粉酶溶液 ,于 3740℃ 保溫 16h。 操作步驟 ? 樣品均制 → 水解 → 過濾定容 → 氧化去雜質 → 凈化 →測定 → 結果計算 （ 1）水解 : ? 稱取 210g樣品（約含 10200ug核黃素）于 100ml三角瓶中，加入 50mL ，攪拌直至顆粒分散均勻。在波長525nm下測定其熒光強度。 ? 分析方法： ? GB/T — 2023中第一法為熒光法；第二法為微生物法。 二、維生素 B2的測定 ? 維生素 B2即核黃素，在食品中以游離形式或磷酸酯等結合形式存在。 ? 用黑布遮蓋 A、 B反應瓶，靜置分層后下層堿性溶液，加入 2－3g無水硫酸鈉使溶液脫水。 ? 在避光暗環(huán)境中將 3mL 15% 氫氧化鈉加入反應瓶 A，振搖約15s，然后加入 10mL正丁醇；將 3mL堿性鐵氰化鉀溶液加入反應瓶 B, 振搖約 15s，然后加入 10mL正丁醇；將 A、 B兩個反應瓶同時用力振搖，準確計時 。 ? 將 20mL硫胺素標準使用液加入交換柱以代替樣品提取液，即得到標準凈化液。如此 重復三次。保持層析柱中液面始終高于活性人造沸石。于 45－ 50℃ 溫箱過夜保溫（約 16h）。 分析步驟 ?制樣 → 水解 → 凈化 → 氧化 → 干燥 → 測定 → 結果計算 （ 1）提取 ? 精確稱取一定量試樣 5－ 20g（硫胺素含量約為 10－ 30ug）置于 100mL三角瓶中，加入 50－ 75mL ，瓶口加蓋小燒杯后放入高壓鍋中加熱水解 104Pa 30min,涼后取出。在給定的條件下，以及沒有其他物質干擾時，此熒光強度與硫色素量成正比，即與溶液中硫
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