細(xì)胞培養(yǎng)的常見問題及解決方案(參考版)
2024-08-27 02:14本頁面
【正文】 。 ④ DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法：檢出率高．但方法較為復(fù)雜 有專門的去除支原體的試劑，在培養(yǎng)液中加入試劑后傳代培養(yǎng) 3星期左右就可以去除。鏡下支原體為散在于細(xì)胞同圍或附于細(xì)胞膜表面的亮綠色小點。具體方法如下：首先將細(xì)胞接種蓋玻片上，在細(xì)胞未長滿前取出玻片，用不合酚紅的 Hanks液漂洗一下，用 l： 3醋酸甲酵固定 10Min，然后用生理鹽水漂洗．置于用生理鹽水配濃度為 50pg／ ml的 Hoechst 33258中染色10min。 為確定有無支原體污染可做如下檢測： ①相差顯微境檢測：將細(xì)胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶內(nèi)的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察．支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。 支原體污染細(xì)胞后．培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁．多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解．因此易被忽視。多數(shù)支原體適合于偏堿條件下生存 (PH7． 6— 8． 0)，對酸耐受性差。橫斷面與細(xì)胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且中央無顆粒群或中央束。電鏡下觀察支原體膜為三層結(jié)構(gòu)．其中央有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體無細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性．可為圓形、絲狀或梨形。（ 500600prm 5min） ? 如果是貼壁細(xì)胞，用 DHanks或 PBS洗，或?qū)⒓?xì)胞消化
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