細(xì)胞培養(yǎng)的常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案(文件)
【正文】 原體適合于偏堿條件下生存 (PH7． 6— 8． 0)，對(duì)酸耐受性差。 為確定有無(wú)支原體污染可做如下檢測(cè)： ①相差顯微境檢測(cè)：將細(xì)胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察．支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。鏡下支原體為散在于細(xì)胞同圍或附于細(xì)胞膜表面的亮綠色小點(diǎn)。 。 ④ DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法：檢出率高．但方法較為復(fù)雜 有專門的去除支原體的試劑，在培養(yǎng)液中加入試劑后傳代培養(yǎng) 3星期左右就可以去除。具體方法如下：首先將細(xì)胞接種蓋玻片上，在細(xì)胞未長(zhǎng)滿前取出玻片，用不合酚紅的 Hanks液漂洗一下，用 l： 3醋酸甲酵固定 10Min，然后用生理鹽水漂洗．置于用生理鹽水配濃度為 50pg／ ml的 Hoechst 33258中染色10min。 支原體污染細(xì)胞后．培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁．多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解．因此易被忽視。橫斷面與細(xì)胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且中央無(wú)顆粒群或中央束。支原體無(wú)細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性．可為圓形、絲狀或梨形。 問(wèn)題六：細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)一些黑點(diǎn)點(diǎn)，是污染嗎？ ? 肉眼觀察液體是否渾濁 ? 鏡下觀察黑點(diǎn)是否游動(dòng)，要與布朗運(yùn)動(dòng)區(qū)別 ? 細(xì)胞狀態(tài)如何 ? 以上都不是，可
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