細(xì)胞培養(yǎng)的常見問題及解決方案(完整版)
【正文】 ? 必備消毒器械：培養(yǎng)瓶，吸管，離心管等與細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的器械 ? 酒精燈，試管架，剪刀，鑷子，廢液缸等 ? 常備物品：酒精棉球， 75%酒精噴霧瓶，消毒紙巾 ? 以上物品選擇固定的位置放好，以便隨取隨用。（ 500600prm 5min） ? 如果是貼壁細(xì)胞，用 DHanks或 PBS洗，或?qū)⒓?xì)胞消化下來，移入離心管內(nèi)慢速離心，然后棄上清，加入新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng) ? 類似于層析的方法，先將 5ml血清加入離心管，再將細(xì)胞懸液濃縮于 1ml液體中，然后加入血清上層，慢速離心。多數(shù)支原體適合于偏堿條件下生存 (PH7． 6— 8． 0)，對(duì)酸耐受性差。鏡下支原體為散在于細(xì)胞同圍或附于細(xì)胞膜表面的亮綠色小點(diǎn)。 ④ DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法：檢出率高．但方法較為復(fù)雜 有專門的去除支原體的試劑，在培養(yǎng)液中加入試劑后傳代培養(yǎng) 3星期左右就可以去除。 支原體污染細(xì)胞后．培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁．多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解．因此易被忽視。支原體無細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性．可為圓形、絲狀或梨形。 問題一：怎樣做到不污染？ ? １、 工作人員培養(yǎng)成良好的工作習(xí)慣 ? 提前 10分鐘打開吹風(fēng)機(jī) ? 工作人員操作前洗手，戴帽， 戴口罩 ，手套 ? 所用培養(yǎng)基等試劑從冰箱取出后用用 75
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