【正文】 ? 原代培養(yǎng)或購(gòu)買細(xì)胞株，請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的老師指導(dǎo)操作 問題一：怎樣做到不污染？ ? １、為細(xì)胞培養(yǎng)工作創(chuàng)造一個(gè)良好的潔凈環(huán)境 ? 必備消毒器械：培養(yǎng)瓶，吸管，離心管等與細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的器械 ? 酒精燈，試管架，剪刀，鑷子，廢液缸等 ? 常備物品：酒精棉球， 75%酒精噴霧瓶，消毒紙巾 ? 以上物品選擇固定的位置放好，以便隨取隨用。 支原體代謝需固醇類物質(zhì)、部分種類需要精氨酸、 O 2或葡萄糖，每一種支原體都有自身持點(diǎn)。我是因?yàn)樵谧雒庖邿晒獾臅r(shí)候在顯微鏡下看到有支原體污染，然后加 mycoplasma remove reagent大約過了 3星期在用的時(shí)候就沒有支原體污染了。支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。此過程一般不需要離心，培養(yǎng)基中的血清會(huì)中止消化液的活性。 為確定有無支原體污染可做如下檢測(cè)： ①相差顯微境檢測(cè)：將細(xì)胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察．支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。具體方法如下：首先將細(xì)胞接種蓋玻片上，在細(xì)胞未長(zhǎng)滿前取出玻片，用不合酚紅的 Hanks液漂洗一下，用 l： 3醋酸甲酵固定 10Min，然后用生理鹽水漂洗．置于用生理鹽水配濃度為 50pg／ ml的 Hoechst 33258中染色10min。 問題六：細(xì)胞在培養(yǎng)過程中經(jīng)常