細(xì)胞培養(yǎng)的常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案-資料下載頁(yè)
2025-08-16 02:14本頁(yè)面
【正文】 解．因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重者，可致細(xì)胞增殖緩慢．甚至從培養(yǎng)器皿脫落。 為確定有無(wú)支原體污染可做如下檢測(cè)： ①相差顯微境檢測(cè)：將細(xì)胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察．支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。 ②熒光染色法：熒光染色用能與 DNA特異性結(jié)合的熒光染料 Hoechst 33258，可使支原體內(nèi)含有的 DNA著色，染色后用熒光顯微鏡觀察。具體方法如下：首先將細(xì)胞接種蓋玻片上，在細(xì)胞未長(zhǎng)滿前取出玻片，用不合酚紅的 Hanks液漂洗一下，用 l： 3醋酸甲酵固定 10Min，然后用生理鹽水漂洗．置于用生理鹽水配濃度為 50pg／ ml的 Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗 1— 2min．向細(xì)胞面滴加 pH5． 5磷酸緩沖液數(shù)滴，然后置熒光顯微鏡下觀察。鏡下支原體為散在于細(xì)胞同圍或附于細(xì)胞膜表面的亮綠色小點(diǎn)。 ③電鏡檢查；用掃描電鏡方法簡(jiǎn)便快速．也可以利用透射電鏡。 ④ DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法：檢出率高．但方法較為復(fù)雜 有專門(mén)的去除支原體的試劑，在培養(yǎng)液中加入試劑后傳代培養(yǎng) 3星期左右就可以去除。我是因?yàn)樵谧雒庖邿晒獾臅r(shí)候在顯微鏡下看到有支原體污染，然后加 mycoplasma remove reagent大約過(guò)了 3星期在用的時(shí)候就沒(méi)有支原體污染了。
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