【正文】 △ αβ,γδ六元不飽和內(nèi)酯環(huán)兩個吸收峰較五元不飽和內(nèi)酯環(huán)的相應(yīng)吸收分別向低波數(shù)位移約 40 cm1 。 (2)紅外光譜 υc=o峰為特征吸收峰。 △ αβ,γδ六元不飽和內(nèi)酯環(huán)的乙型強心苷元：295~300nm()處呈現(xiàn)最大吸收 。 (1)紫外光譜 強心苷類化合物：分子中苷元部分存在五元或六元不飽和內(nèi)酯環(huán)，其紫外吸收光譜的特征較顯著。硅膠和氧化鋁吸附色譜一般可用氯仿 甲醇，乙酸乙酯 甲醇等溶劑系統(tǒng)洗脫，反相硅膠吸附色譜可用水 甲醇、甲醇 氯仿等溶劑系統(tǒng)洗脫。 各個部分中如有含量較高的組分，可用適當?shù)娜軇┙Y(jié)晶，再進一步用適當?shù)娜軇┨崛『笫怪Y(jié)晶或純化，但一般還需要用各種色譜方法分離。 提取分離單體強心苷的難度：成分復(fù)雜；含量較低；發(fā)生水解、脫水及異構(gòu)等反應(yīng)。界面的顏色隨苷元羥基、雙鍵位置和數(shù)目不同而異。 ③ α 去氧糖的顯色反應(yīng) a． KellerKiliani(k k)反應(yīng)： 取樣品 lmg溶于 5mL冰醋酸中，加 l滴 20％三氯化鐵水溶液，傾斜試管，沿管壁徐徐加入 5mL濃硫酸，觀察界面和乙酸層的顏色變化。故能用活性亞甲基試劑顯色作用區(qū)別甲型和乙型強心苷。 b． Salkowski反應(yīng)： 強心苷溶于氯仿，沿管壁緩緩加入濃硫酸靜置，氯仿層呈血紅色或青色，硫酸層有綠色熒光。 a．乙酐 濃硫酸反應(yīng)： 強心苷溶于氯仿，加冷乙酐 濃硫酸 (3： 2)混合液數(shù)滴，反應(yīng)液呈黃 紅 藍 紫 綠的顏色變化，最后褪色。 (3)顯色反應(yīng) 強心苷除了一般苷類的顯色反應(yīng)外，由于強心苷分子中有 甾體母核、不飽和內(nèi)酯環(huán)和 α去氧糖等結(jié)構(gòu)部分，可與一些化學(xué)試劑發(fā)生反應(yīng)而顯特定的顏色。在醇溶液中，氫氧化鈉、氫氧化鉀也能使內(nèi)酯環(huán)開裂，但同時還使其結(jié)構(gòu)異構(gòu)化，故酸化也不再有可逆變化。 劇烈的堿水解： 試劑有氫氧化鈉、氫氧化鉀。 溫和的堿水解： 試劑有碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈣和氫氧化鋇。堿試劑可使強心苷分子中的 酰基水解、內(nèi)酯環(huán)開裂、△ 20(22)轉(zhuǎn)位及苷元異構(gòu)化等 。因為強心苷的強心作用與分子中糖基數(shù)目有關(guān)，即苷的強心作用強度為：單糖苷 二糖苷 三糖苷。 由于酶解法具有條件溫和，選擇性好，產(chǎn)率高等特點，在強心苷生成中有很重要的作用。 與強心苷共存的酶只能使末位的葡萄糖脫離，而不能水解 2去氧糖，從而去除分子中的葡萄糖而保留 2去氧糖。其中， C14羥基和 5β 羥基均系叔羥基，最易發(fā)生脫水反應(yīng)， C16羥基也可與 C17氫脫水。較劇烈的條件： 3％～ 5％ HCl, 增加作用時間或同時加熱，才能使其水解。 方法：用稀酸 (～ )在含水醇中經(jīng)短時間 (半小時至數(shù)小時 )加熱回流，可使強心苷水解成苷元和糖。 苷元結(jié)構(gòu)中的不飽和內(nèi)酯環(huán)： 堿水解 ① 溫和的酸水解 主要針對 2去氧糖與苷元 形成的苷鍵。 (2)水解反應(yīng) 強心苷的苷鍵： 酸、酶水酸。與皂苷類化合物相似，結(jié)構(gòu)中的糖基的數(shù)量和苷元中羥基等極性基團的數(shù)量的多少及位置，決定了化合物的溶解性，使各個強心苷的溶解性差別較大。味苦， C17側(cè)鏈 α 構(gòu)型的味不苦，但無療效。 (2) 蟾蜍甾烯類或稱海蔥甾二烯類或 乙型 強心苷元 1356891 01 11 31 81 51 72 02 21 92 1HHHOO2 32 4甾體母核部分的 C17位上連接的六元不飽和內(nèi)酯環(huán)即 △ αβ,γδ 雙烯 δ 內(nèi)酯 ，故乙型強心苷元共由 24個碳原子組成。 結(jié)構(gòu)特征 :甾體母核的 C17位上均連接一個 不飽和內(nèi)酯環(huán)。 五、強心苷 1. 強心苷的結(jié)構(gòu)分類 化學(xué)結(jié)構(gòu)：由 強心苷元 和 糖 縮合而成的一類苷。質(zhì)譜中均出現(xiàn)一很強的 m/z 139基峰 和中等強度的m/z 155碎片峰 及一個很弱的 m/z 126輔助離子峰 ，這些峰均來自 E環(huán)和 F環(huán)部分。 三萜皂苷元： 高場區(qū)出現(xiàn)甲基信號， ~ 左右出現(xiàn)堆積成山的亞甲基信號；低場區(qū)出現(xiàn)一些受雙鍵、羰基或羥基影響的特征氫信號。C16位、 C26位 上的氫處于較低場。非共軛體系羰基 :1751~1705cm1一個吸收峰 共軛體系羰基 :1697~1693cm1和 1605~1600cm1二個吸收峰 ： 除在 1580~1680cm1 有紅外吸收峰外，在 3070~3085cm1和 680~690cm1處可見較弱的吸收峰。 甾體皂苷元 產(chǎn)生共軛體系 明顯的吸收峰 H2SO4 (2) 紅外光譜 C25的立體異構(gòu)體 。 可用于甾體皂苷元的定性定量測定。然后結(jié)合硅膠柱色譜或高效液相色譜法進一步分離純化，得到單體皂苷類成分。 ：一般用反相色譜柱進行分離 ,以甲醇 水或乙腈 水系統(tǒng)為流動相分離和純化。 粗皂苷 溶于少量甲醇或乙醇 滴加乙醚或丙酮或乙醚 丙酮 (1:1)的混合溶劑 析出極性較大的皂苷 降低溶劑極性 析出極性較小的皂苷 粗皂苷 溶于少量乙醇 沉淀 膽甾醇的飽和乙醇溶液 水、醇、乙醚順次洗滌除去糖類、色素、油脂 過濾 乙醚抽提 乙醚 (膽甾醇 )甾體皂苷 :吸附劑常用硅膠和反相硅膠，洗脫劑一般采用混含溶劑。 另： 醋酐一濃硫酸反應(yīng)； 氯仿一濃硫酸反應(yīng)； 三氯醋酸反應(yīng)； 五氯化銻反應(yīng)； 芳香醛一硫酸或高氯酸反應(yīng) 中草藥 乙醇或 甲醇 醇提取物 濃縮 水 水不溶物 水溶液 水溶液 石油醚 或苯等 有機相 (油脂、色素等 ) 水相 (皂苷 ) 水相 (皂苷 ) 丁醇 水層 (糖類等 ) 丁醇層 (皂苷 ) 減壓濃縮 總皂苷 (1) 皂苷元的提取 粗皂苷 酸水解 苯或 氯仿等 皂苷元 注意： 皂苷元易發(fā)生脫水、環(huán)合、雙鍵移位、取代基移位、構(gòu)型轉(zhuǎn)化等變化，應(yīng)避免劇烈的酸水解。利用這些反應(yīng)檢識皂苷雖然比較靈敏，但專屬性較差。 溫和的水解方法： Smith氧化降解法、酶解法、土壤微生物培養(yǎng)法或光解法等。如 人參皂苷的酸水解 得到的苷元是 C20位為 R構(gòu)型 的人參二醇或人參三醇，而實際應(yīng)是四環(huán)三萜類 20(S)原人參二醇或 20(S)原人參三醇。 兩種方式 劇烈水解方法： 2～ 4mol/L無機酸。 溶血指數(shù) :皂苷定量的指標 . 溶血指數(shù) :是指皂苷對同一動物來源的紅細胞稀懸浮液，在同一的等滲條件、緩沖條件及恒溫下造成完全溶血的最低濃度。 (2) 發(fā)泡性 用 發(fā)泡實驗 可以初步判斷皂苷的有無及區(qū)別三萜皂苷與甾體皂苷。 123 4567891 01 11 21 31 41 82 52 3 2 42 71 51 72 02 22 62 82 9 3 0C O O HH O齊 墩