第十六章基因工程和蛋白質(zhì)工程簡介(參考版)
2025-08-04 13:26本頁面
【正文】 DNA芯片技術(shù)簡介 DVA芯片工作示意圖 emission Laser 1 Laser 2 puter analysis DNA clones test reverse transcription Label with fluor dyes PCR amplification purfication hybridize target to microarray robotic printing reference 。芯片陣列中的每一個(gè)單元微點(diǎn)都是一個(gè)傳感器的探頭，所以傳感器技術(shù)的精髓往往都被用于芯片的發(fā)展。 DNA芯片 (DNA chip)技術(shù)是采用寡核苷酸原位合成或顯微打印手段，將數(shù)以萬計(jì)的 DNA探針片段有序地固化于支持物表面上，產(chǎn)生二維 DNA探針陣列，然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，反應(yīng)結(jié)果通過檢測雜交信號(hào)的方法（同位素法、化學(xué)熒光法、化學(xué)發(fā)光法或酶標(biāo)法）顯示，再用精密的掃描儀或 CCD攝象技術(shù)記錄，通過計(jì)算機(jī)軟件分析，綜合成可讀的 IC總信息，來實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品的快速、并行、高效地檢測或診斷。 n一循環(huán)次數(shù)。擴(kuò)增的公式為 : Y=(1+X)n 式中 y一產(chǎn)量 。該法模仿體內(nèi) DNA的復(fù)制過程，首先使 DNA變性，兩條鏈解開，然后使引物模板退火，二者堿基配對(duì)， DNA聚合酶隨即以4種 dNTP為底物，在引物的引導(dǎo)下合成與模板互補(bǔ)的 DNA新鏈。 為使低豐度的 mRNA的 cDNA克隆存在的概率大于 99%， cDNA文庫應(yīng)含的克隆數(shù)的計(jì)算公式如下： N=ln(1p)/ln(11/n) N? cDNA文庫所包含克隆的數(shù)目； p ? 低豐度 cDNA存在于基因文庫中的概率，要求其大于 99%； 1/n ? 每一種 低豐度的 mRNA占總 mRNA的分?jǐn)?shù)。將細(xì)胞全部 mRNA反轉(zhuǎn)錄成 cDNA并被克隆的總和稱為 cDNA文庫。真核生物基因不能在原核生物中表達(dá)，只有將加工成熟的 mRNA反轉(zhuǎn)錄成 cDNA （ plemental DNA）接上原核生物表達(dá)控制元件，才能在原核生物中表達(dá)。 基因文庫中應(yīng)包含多少 DNA克隆才能使任意所需要的基因以極高的概率存在于該文庫中？其計(jì)算公式如下： N=ln(1p)/ln(1f) N ? 基因文庫所包含克隆的數(shù)目； p ? 任意所需基因存在于基因文庫中的概率，要求大于99%； f ? 克隆的 DNA片段大?。?bp） 占基因組大小 (bp)的分?jǐn)?shù)。應(yīng)用 DNA重組技術(shù)，可以將各種生物體全部基因組的遺傳信息，貯存在可以長期保存的穩(wěn)定重組體中，以備需要時(shí)應(yīng)用。反應(yīng)中包含分別帶 4色熒光標(biāo)記的 ddNTP(終止子 ) unlabeled primer template DNA + AmpliTaq FS dATP, dCTP, dGTP, dTTP ddCTP ddATP ddGTP ddTTP 測序反應(yīng)結(jié)束后，采用乙醇沉淀法進(jìn)行純化，除去過量的 ddNTP后上樣。 4個(gè)
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