蛋白質(zhì)工程ppt課件(參考版)
2024-09-22 20:21本頁面
【正文】 。 枯草桿菌蛋白酶 ? 枯草桿菌蛋白酶是重要的工業(yè)用酶。溶解血栓，目前進(jìn)行 tPA蛋白質(zhì)工程的研究主要是構(gòu)建長半衰期的 tPA 突變體。 ? 流式細(xì)胞計數(shù)法 :細(xì)胞經(jīng)熒光染色后，通過 高速流動系統(tǒng)，排成單行，逐個通過流式細(xì) 胞計數(shù)儀進(jìn)行測定。 高通量篩選技術(shù) ? 突變微生物分離 ? 瓊脂板涂布法在特殊條件下培養(yǎng)突變菌通過宿主菌的生長情況、培養(yǎng)基顏色、特定反應(yīng)的出現(xiàn)等判斷是否具有目的基因。 ?突變體基因篩選能否成功的關(guān)鍵是將基因的表型和能通過定量表征的篩選手段緊密聯(lián)系。 ? 分子育種 DNA改組原理 ； ； 段復(fù)性； 2244步后可獲得全 DNA片段片段 單個基因的 DNA改組 ? 從突變體基因庫中分離出的 DNA片段用脫氧核糖核酸酶 I隨機(jī)切割得到的隨機(jī)片段 ? 經(jīng)過不加引物的多次PCR循環(huán) ? 在 PCR循環(huán)過程中，隨機(jī)片段之間互為模板和引物進(jìn)行擴(kuò)增，直到獲得全長的基因， ? 這導(dǎo)致來自不同基因片段之間的重組 基因家族改組技術(shù) (family shuffling) ? 采用基因家族的改組效果明顯高于單個基因的改組效果。 DNA改組技術(shù) (DNA shuffling) ? 又稱有性 PCR，指 DNA分子的體外重組，是基因在分子水平上進(jìn)行有性重組。 ? 此法突變具有一定的密碼偏向性。 ? 關(guān)鍵是控制 DNA的突變頻率。重復(fù)循環(huán)，直至得到預(yù)期性狀的酶。 定向進(jìn)化的歷史 酶定向進(jìn)化的過程 ? 酶定向進(jìn)化通常分 3步進(jìn)行： ? 通過隨機(jī)突變和 (或 )基因體外重組創(chuàng)造基因多樣性； ? 導(dǎo)入適當(dāng)載體后構(gòu)建突變文庫； ? 通過靈敏的篩選方法，選擇陽性突變子。 ? 1994年， Stemmer將 DNA重組方法引用到酶分子的定向進(jìn)化中。 RNA噬菌體 Q 定向進(jìn)化的歷史 ? 1981年， ebg酶的底物專一性，開發(fā)出對幾種糖苷鍵有水解能力的酶。 ? 選擇特殊環(huán)境，利用酶定向進(jìn)化技術(shù)重新設(shè)計及改進(jìn)酶分子的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，可以逐步接近和滿足將酶催化用于工業(yè)生產(chǎn)的需要。 定向進(jìn)化 與自然進(jìn)化 自然進(jìn)化 ? 自然進(jìn)化是環(huán)境壓力下物種朝著適應(yīng)生存 環(huán)境的方向發(fā)展 ? 自然進(jìn)化是漫長時間里通過 DNA復(fù)制發(fā)生突變或通過重組， ? 自然進(jìn)化是產(chǎn)生了遺傳多樣性 ? 自然進(jìn)化是自發(fā)、非常緩慢、自然選擇 定向進(jìn)化 ? 定向進(jìn)化 在實驗室中模仿自然進(jìn)化 ? 定向進(jìn)化 的關(guān)鍵步驟：突變、重組和篩選，在較短時間內(nèi)完成漫長的自然進(jìn)化過程， ? 定向進(jìn)化 有效改造蛋白質(zhì)，使之適于人類的需
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